丙草胺和乙草胺的酶聯(lián)免疫吸附分析方法研究.pdf

1、本論文以除草劑丙草胺和乙草胺為研究對(duì)象，合成了丙草胺半抗原(PMPA)和乙草胺半抗原(APMA)，采用碳二亞胺法將半抗原與牛血清蛋白BSA偶聯(lián)獲得免疫抗原，采用混合酸酐法將半抗原與卵清蛋白0VA偶聯(lián)獲得包被抗原，并免疫新西蘭大白兔，獲得相應(yīng)的多克隆抗體。當(dāng)包被抗原的濃度為4mg/L時(shí)，丙草胺和乙草胺的抗體的效價(jià)分別達(dá)1.02×106和2.56×105。
　　 通過(guò)方陣滴定法篩選ELISA包被抗原和抗體的最適工作濃度，進(jìn)一步研究了

2、有機(jī)溶劑、離子強(qiáng)度和pH值等因素對(duì)間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法的影響，確定了丙草胺和乙草胺ic-ELISA法的最佳條件。丙草胺ELISA法的最佳條件：包被原和抗體的最適工作濃度分別為0.5mg/L和1mg/L，免疫反應(yīng)體系為10％的甲醇含量、pH7.5以及離子強(qiáng)度0.14mol/L的磷酸鹽緩沖溶液；乙草胺ELISA法的最佳條件：包被原和抗體的最適工作濃度分別為1mg/L和2mg/L，免疫反應(yīng)體系為不含有機(jī)溶劑、pH7.5和0.4mol/L的離子

3、強(qiáng)度的磷酸鹽緩沖溶液。
　　 在優(yōu)化的條件下，以Logit(B/B0)為縱坐標(biāo)與待測(cè)物的濃度對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)建立丙草胺與乙草胺的標(biāo)準(zhǔn)曲線。在0.001～1.000mg/L濃度范圍內(nèi)，Logit(B/B0)與丙草胺濃度對(duì)數(shù)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，得回歸方程y=-0.591x-0.8539,R2=0.9909,IC50為0.0415mg/L。與乙草胺、丁草胺、吡草胺和甲霜靈這幾種結(jié)構(gòu)相似的農(nóng)藥沒(méi)有明顯交叉反應(yīng)，方法的特異性高。在0.025～

4、5mg/L濃度范圍內(nèi)，Logit(B/B0)與乙草胺濃度對(duì)數(shù)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，得線性回歸方程y=-0.7421x-0.2996,R2=0.9902,IC50為0.3718mg/L。該方法有著較好的特異性，對(duì)丙草胺、丁草胺、吡草胺和甲霜靈這幾種結(jié)構(gòu)類似物沒(méi)有明顯的交叉反應(yīng)。
　　 以優(yōu)化的ic-ELISA方法進(jìn)行添加回收率實(shí)驗(yàn)測(cè)定，評(píng)價(jià)方法的準(zhǔn)確度和精密度。結(jié)果表明，丙草胺添加濃度在0.05～5mg/L，方法在水樣的回收率和變異

5、系數(shù)分別為77.0～115.2％和2.3～9.4％％;土壤中添加濃度0.1、0.5和1mg/kg，其回收率和變異系數(shù)分別為79.1～92.3％和4.0～8.4％。乙草胺添加濃度在0.1～10mg/L，方法在水樣的添加回收率和變異系數(shù)為73.2～117.6％，變異系數(shù)在3.2～6.4％之間；添加濃度在0.1～1mg/kg范圍內(nèi)，方法在土壤、玉米和大豆中的添加回收率和變異系數(shù)分別為77.3～98.6％和1.7～9.2％。水樣用緩沖液PBS稀