42份菊科花卉的離體保存及其遺傳多樣性的RAPD分析.pdf

1、本研究收集了42份菊科花卉種質(zhì)資源。以菊科花卉帶腋芽的莖段為外植體,建立菊科花卉的再生體系;以‘追魚’菊花試管苗為材料,探討試管苗限制生長(zhǎng)保存方法并采用RAPD技術(shù)進(jìn)行遺傳穩(wěn)定性的檢測(cè),以期為菊科花卉的離體繁殖和離體種質(zhì)保存提供科學(xué)依據(jù);對(duì)收集的42份菊科花卉進(jìn)行試管保存,并利用RAPD技術(shù)進(jìn)行了的遺傳多樣性分析。主要研究結(jié)果如下:
　　 1.菊科花卉再生體系的建立。
　　 以‘追魚’菊花的莖段和‘追魚’菊花試管苗為材料

2、,分別研究其消毒、增殖、生根、移栽的最佳條件。試驗(yàn)結(jié)果表明:最佳消毒方法為75％酒精(30s)+0.1％的HgCl2(3 min)+無菌水+0.1％的HgCl2(3 min);最佳增殖培養(yǎng)基為MS+0.3 mg/L6-BA+0.15 mg/LNAA,增殖系數(shù)達(dá)到9.05;最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.2 mg/LNAA;最佳移栽基質(zhì)為蛭石:泥炭土(1:2)的混合基質(zhì)。
　　 2.菊科花卉試管苗離體保存方法的探討。
　　

3、 以‘追魚’菊花試管苗生長(zhǎng)3個(gè)月后的莖切段為材料,比較了不同濃度的蔗糖、瓊脂、山梨醇和蔗糖、生長(zhǎng)抑制物質(zhì)、光照強(qiáng)度和光質(zhì)等因素對(duì)試管苗限制生長(zhǎng)保存的影響。結(jié)果表明:在MS培養(yǎng)基中添加40g/L蔗糖與15g/L山梨醇的處理保存效果最好,保存10個(gè)月時(shí),存活率為77.8％,適宜的繼代周期是8個(gè)月;光照強(qiáng)度對(duì)‘追魚’菊花的離體保存影響不顯著;添加30mg/LABA也有利于試管苗的離體保存。
　　 3.菊科花卉試管苗限制生長(zhǎng)保存前后遺傳

4、穩(wěn)定性的分析
　　 以限制生長(zhǎng)法保存了15個(gè)月與保存前的菊花試管苗為材料,采用RAPD-PCR標(biāo)記技術(shù)對(duì)菊花試管苗保存前后的遺傳變異進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果表明:保存前后的菊花RAPD圖譜基本一致,說明保存后沒有發(fā)生DNA水平的變異,遺傳穩(wěn)定性好,同時(shí)也說明這種限制生長(zhǎng)保存方法可以適用于菊花的短期離體保存。
　　 4.42份菊科花卉種質(zhì)資源的試管苗限制生長(zhǎng)保存
　　 采用優(yōu)化的保存方法對(duì)所收集的菊科花卉種質(zhì)資源進(jìn)行試管苗

5、限制生長(zhǎng)保存。每隔7個(gè)月繼代1次,菊屬,蟛蜞菊屬的試管苗保存效果良好,保存后進(jìn)行移栽,生長(zhǎng)正常。其中萬壽菊屬的試管苗在保存過程中易出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象。
　　 5.42份菊科花卉種質(zhì)資源遺傳多樣性的RAPD分析
　　 采用RAPD技術(shù)對(duì)42份菊科花卉種質(zhì)資源進(jìn)行了遺傳多樣性分析。結(jié)果表明:11個(gè)隨機(jī)引物共產(chǎn)生127條擴(kuò)增帶,其中,擴(kuò)增出的多態(tài)性譜帶126條,多態(tài)性比率達(dá)99.2％,這表明42份菊科花卉的遺傳多態(tài)性高,遺傳資源的