棗谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶的克隆、表達(dá)及其與棗瘋病相關(guān)性研究.pdf

1、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(Glutathione S-transferases,GSTs)在植物體內(nèi)普遍存在,是由多基因家族編碼的多功能蛋白酶。依據(jù)同源性不同,GSTs在高等植物中可典型地分為Phi、Tau、Zeta、Lambda、Theta和脫氫抗壞血酸還原酶(Dehydroascorbate reductases,DHARs)6類,其中Phi和Tau類是植物本身所特有的類別。GSTs在調(diào)節(jié)植物的生長發(fā)育中有重要作用,當(dāng)植物受生物和非生物因素的

2、脅迫時會誘導(dǎo)GSTs表達(dá),所以研究GSTs對探討植物的生長發(fā)育以及植物對環(huán)境脅迫的反應(yīng)機(jī)制都有重要作用。本試驗(yàn)應(yīng)用Step out PCR(SO-PCR)改良RACE技術(shù)成功得到了棗GSTs完整編碼區(qū)序列,并對其相關(guān)功能進(jìn)行了分析。棗GST基因的克隆與分析目前國內(nèi)外尚無報(bào)道。主要結(jié)果如下:
　　 1、利用同源基因克隆法和改良的RACE技術(shù),首次獲得了棗(Ziziphus jujubaMill.)谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(ZjGSTU1)全

3、長序列,長度為914 bp,包括669 bp組成的開放閱讀框(基因登錄號HM345954),編碼222個氨基酸；3'端非編碼區(qū)206 bp。
　　 2、經(jīng)氨基酸序列比對和系統(tǒng)進(jìn)化分析,確定本試驗(yàn)獲得的棗谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶基因(ZjGSTU1)屬于谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GSTs)的Tau類家族,該基因與Genbank中楊樹、蓖麻、擬南芥和燈籠椒中的GST同源性分別為84％、76％、74％、73％。
　　 3、對獲得的棗谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶

4、完整編碼區(qū)序列進(jìn)行了原核表達(dá),在菌液沉淀中有大約30kDa的蛋白存在。經(jīng)NCBI預(yù)測,棗ZjGSTU1編碼約25kDa蛋白,pET-30a的His標(biāo)簽編碼約5.5kDa蛋白,兩者之和與沉淀中大量表達(dá)的蛋白大小一致。證明沉淀中大量表達(dá)的蛋白即為棗ZjGSTU1表達(dá)蛋白。隨后,將純化后的蛋白送河北省科學(xué)院生物研究所進(jìn)行了抗體制備,獲得理想結(jié)果。
　　 4、通過組培苗和田間材料的綜合Western blot分析,證明棗樹中ZjGSTU