高效重組SpltMNPV的構(gòu)建和篩選.pdf

1、斜紋夜蛾(Spedoptera litura)是一種雜食性農(nóng)業(yè)和林業(yè)害蟲,國(guó)外主要分布于朝鮮、日本、印度、澳大利亞等國(guó),在我國(guó)各省、市、自治區(qū)均有發(fā)生,其寄主范圍極廣,能夠危害109科389種寄主植物,是各種農(nóng)作物和綠化植物的重要害蟲。盡管斜紋夜蛾核型多角體病(Spodoptera litura multicapsidnucleopolyhedroviruse,SpltMNPV)已在中國(guó)商品化并大規(guī)模用來(lái)控制棉花葉蟲,但它緩慢的殺蟲速度

2、、較窄的宿主范圍、對(duì)紫外線敏感等特點(diǎn)限制了其在全國(guó)范圍的推廣。因此,開(kāi)發(fā)高效重組SpltMNPV殺蟲劑顯得R益迫切。SpltMNPV日本株(C3)(又命名為SpltMNPVⅡ)是Kamiya等從日本全國(guó)各地野外感病幼蟲收集、分離到189個(gè)SpltMNPV克隆中繁殖率和毒力極強(qiáng)的一種新型病毒株。
　　 本研究在SpltMNPVⅡ的基礎(chǔ)上成功構(gòu)建并篩選了egt缺失的,表達(dá)BmKITa1成熟肽的重組SpltMNPV,并測(cè)定其生物學(xué)活性

3、。主要成果包括：⑴運(yùn)用分子克隆方法構(gòu)建了重組轉(zhuǎn)移載體Psk-Δegt-Pph-egfp-Pph-BmK ITa1,載體質(zhì)粒和SpltMNPVⅡ基因組DNA共轉(zhuǎn)染SpLi細(xì)胞,經(jīng)多輪熒光斑法和有限稀釋法相結(jié)合成功篩選出重組病毒SpltMNPV-Δegt—Pph-egfp-Pph-BmK ITa1,并測(cè)定其生物學(xué)活性。和野生型病毒相比,在病毒濃度為107 polyhedra/larva時(shí),重組SpltMNPV-Δegt—Pph-egfp—P

4、ph-BmK ITa1的殺蟲速度提高了50％。⑵運(yùn)用分子克隆方法構(gòu)建了重組轉(zhuǎn)移載Psk—Δegt-Pph-egfp-ie-1-BmK ITa1,載體質(zhì)粒和SpltMNPVⅡ基因組DNA共轉(zhuǎn)染SpLi細(xì)胞,經(jīng)多輪熒光斑法和有限稀釋法相結(jié)合成功篩選出重組病毒SpltMNPV-Δegt-Pph-egfp-ie-1-BmK ITa1,并測(cè)定其生物學(xué)活性。和野生型病毒相比,在病毒濃度為107 polyhedra/larva時(shí),重組SpltMNPV