奶牛輸卵管上皮細(xì)胞前列腺素E2和F2α對其合成酶mRNA表達(dá)的反饋調(diào)控作用研究.pdf

1、前列腺素是花生四烯酸的環(huán)氧合酶代謝產(chǎn)物，為二十碳不飽和脂肪酸。體內(nèi)分布廣泛。前列腺素類化合物是動物繁殖過程中關(guān)鍵的調(diào)節(jié)因子，可影響生殖生理過程的多個環(huán)節(jié)，本研究旨在探討雌激素(estrogen，E2)對奶牛輸卵管上皮細(xì)胞中前列腺素E2和F2α合成酶(PGES和PGFS)表達(dá)的影響，探討前列腺素EP受體激動劑butaprost和FP受體激動劑fluprostenol對奶牛輸卵管上皮細(xì)胞中環(huán)氧合酶1（COX-1）、環(huán)氧合酶2（COX-2）以

2、及PGES和PGFS表達(dá)的影響，以及EP受體激動劑butaprost和FP受體激動劑 fluprostenol對前列腺素PGE2和PGF2α合成分泌的調(diào)控作用。
　　方法：1）建立荷斯坦奶牛輸卵管上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)技術(shù)，細(xì)胞傳至第四代作為實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞。2）用不同時間（2 h、4 h、8 h、16 h、24 h和48 h）和不同濃度（10-12，10-11，10-10，10-9 mol/L）的雌激素E2作用于奶牛輸卵管上皮細(xì)胞，采用實(shí)

3、時熒光定量PCR技術(shù)檢測上皮細(xì)胞中PGES和PGFS的mRNA表達(dá)量。3）以吲哚美辛(10-6-10-5mol/L)消除上皮細(xì)胞中內(nèi)源性前列腺素的干擾，用不同濃度（10-12-10-9mol/L）的E2作用于上皮細(xì)胞，采用實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)檢測PGES和PGFS的mRNA表達(dá)量。4）分別以不同濃度（10-9-10-5mol/L）的butaprost和fluprostenol作用于奶牛輸卵管上皮細(xì)胞，以吲哚美辛（10-5mol/L）消

4、除上皮細(xì)胞內(nèi)源性前列腺素的干擾，采用RT-PCR技術(shù)檢測COX-1、COX-2、PGES和PGFS的mRNA表達(dá)量。5）以雌激素(10-12 mol/L)和不同濃度（10-9-10-5mol/L）的butaprost和fluprostenol作用奶牛輸卵管上皮細(xì)胞，用ELISA技術(shù)檢測PGE2和PGF2α的合成分泌量。
　　結(jié)果：首先，成功培養(yǎng)得到了奶牛輸卵管上皮細(xì)胞的原代細(xì)胞和傳代細(xì)胞，且第四代細(xì)胞生長良好。其次，E2在濃度為1

5、0-10 mol/L作用4 h和濃度為10-12 mol/L作用24 h時，PGES和PGFS的mRNA表達(dá)量分別與空白組對比呈顯著性增高。第三，以吲哚美辛(10-6-10-5 mol/L)消除內(nèi)源性前列腺素的干擾后，PGES和PGFS的mRNA表達(dá)量與空白組對比呈顯著性增高，且在添加E2后，其對PGES和PGFS的表達(dá)量的增高作用更加顯著。第四，分別以不同濃度（10-9-10-5mol/L）的butaprost和fluprosteno

6、l作用4 h后，COX-1的表達(dá)與空白相比無顯著性差異，COX-2的表達(dá)量與空白組對比呈顯著性增高，其表達(dá)量與給藥濃度呈正相關(guān)。PGES和PGFS的表達(dá)量分別與空白組對比呈顯著性下降，其表達(dá)量與給藥濃度呈負(fù)相關(guān)。以吲哚美辛消除內(nèi)源性前列腺素的干擾后，添加butaprost和fluprostenol作用4 h，COX-1、COX-2、PGES和PGFS的表達(dá)量與單獨(dú)添加butaprost和fluprostenol的結(jié)果相似。第五，E2作用