miRNA與水稻種子活力的相關(guān)性研究.pdf

1、miRNA(microRNA)是一類真核生物細(xì)胞中廣泛存在的內(nèi)源性非編碼的單鏈小分子RNA,大小為19～25 nt。越來越多的研究發(fā)現(xiàn),miRNA是真核生物體內(nèi)基因表達(dá)的重要調(diào)節(jié)因子。
　　 本文以常規(guī)水稻ZR02為材料,試圖探討miRNA表達(dá)與種子活力的相互關(guān)系。首先采用人工老化處理,得到不同活力水平的種子,然后通過miRNA芯片比較分析了四個不同活力水平的種子胚中miRNA的表達(dá)差異,并通過熒光定量PCR技術(shù)對差異表達(dá)的mi

2、RNA進(jìn)行了驗(yàn)證分析,進(jìn)一步通過生物信息學(xué)的方法,初步分析了這些差異表達(dá)miRNA的靶基因及其功能。主要結(jié)果如下:
　　 1.隨著人工老化處理時間的延長,種子活力逐漸下降,種子活力的重要指標(biāo)一萌發(fā)率在老化處理12 d時降低到75％左右,此后下降速率明顯加快,老化至第22 d時種子喪失萌發(fā)能力(萌發(fā)率為O)。
　　 2.通過miRNA芯片比較分析了人工老化至不同活力水平的種胚中miRNA的差異表達(dá)。結(jié)果表明,隨著種子活力降

3、低,miRNA的表達(dá)模式可分為以下四種情況:(1)表達(dá)逐步下調(diào),如miR160和miR444a.2/miR444d.2/miR444e；(2)表達(dá)逐步上調(diào),如miR817、miR399j等；(3)交替上、下調(diào)表達(dá),相比于未老化種子,表達(dá)總體水平上調(diào),如miR395t、miR164c等；(4)交替上、下調(diào)表達(dá),相比于未老化種子,表達(dá)總體水平下調(diào),如miR164e、miR167(a-j)。
　　 3.通過實(shí)時定量PCR進(jìn)一步驗(yàn)證芯片

4、分析獲得的20個表達(dá)差異明顯的miRNA,結(jié)果表明,miR817、miR399j、miR399d、miR395t、miR164c、miR168a等6個的表達(dá)量變化與芯片結(jié)果較為一致。
　　 4.同源miRNA成熟序列的保守性與其在不同活力種胚中的表達(dá)量變化的相關(guān)性分析表明,成熟序列保守性高的同源miRNAs在不同活力種胚中的表達(dá)量的變化規(guī)律較為相似,保守性較低的同源miRNAs表達(dá)差異較大。
　　 5.通過生物信息學(xué)的方