蟾蜍坐骨神經(jīng)-腓腸肌標本的制備坐骨神經(jīng)干標本的制備縫匠肌神經(jīng)標本制備

1、<p>　　實驗六 蟾蜍坐骨神經(jīng)-腓腸肌標本的制備</p><p>　　坐骨神經(jīng)干標本的制備、縫匠肌神經(jīng)標本制備</p><p><b>　　一、實驗?zāi)康?lt;/b></p><p>　　1、急性動物實驗（與慢性動物實驗的區(qū)別）</p><p>　　2、離體標本實驗（與在體標本實驗的區(qū)別）</p>&

2、lt;p>　　3、掌握鋅銅弓導(dǎo)致生物電產(chǎn)生的原理</p><p>　　4、掌握離體標本的制備及手術(shù)訓(xùn)練</p><p>　　5、掌握剪刀的技用和雙毀髓的意義</p><p><b>　　二、實驗原理</b></p><p>　　1、急性動物實驗與慢性動物實驗，在體實驗與離體實驗</p><p&g

3、t;　　急性動物實驗可分為離體和在體實驗兩種方法。</p><p>　　離體實驗：是從活著的或剛處死的動物身上取出所需要的器官、組織、細胞或細胞中的某些成分。置于一個能保持其正常功能活動的人工環(huán)境中，觀察某些人為的干預(yù)因素對其功能活動的影響。例如，對離體蛙心或動物血管條進行灌流，可用于研究某些生物活性物質(zhì)或藥物對心肌或血管平滑肌收縮力的影響；應(yīng)用膜片鉗技術(shù)可研究細胞小片膜上單個離子通道的電流特性。</p&g

4、t;<p>　　在體實驗：是在動物麻醉條件下，手術(shù)暴露某些所需研究的部位，觀察和記錄某些生理功能在人為干預(yù)條件下的變化。例如，以動脈插管記錄動物血壓，可用于觀察某些神經(jīng)或體液因素對血壓的影響；將玻璃微電極插入腦內(nèi)某些部位進行細胞外或細胞內(nèi)記錄，觀察神經(jīng)元在接受某些刺激時放電活動的變化，以了解這些神經(jīng)元的生理功能。急性動物實驗的優(yōu)點是實驗條件比較簡單，條件較易控制，便于進行直接的觀察和細致的分析；離體實驗則更能深入到細胞和分

5、子水平，有助于揭示生命現(xiàn)象中最為本質(zhì)的基本規(guī)律。但急性動物實驗的結(jié)果可能與生理條件下完整機體的功能活動有所不同，尤其是離體實驗的結(jié)果，此時被研究的對象，如器官、組織、細胞或細胞中的某些成分已經(jīng)脫離整體，它們所處的環(huán)境已發(fā)生很大的改變，實驗結(jié)果與在整體中的真實情況相比，可能會有很大的差異。</p><p>　　慢性動物實驗：慢性動物實驗以完整、清醒的動物為研究對象，且盡可能保持外界環(huán)境接近于自然，以便能在較長時間內(nèi)

6、觀察和記錄某些生理功能的改變。實驗前一般需對動物作某些預(yù)處理，待動物康復(fù)后再進行觀察。例如，研究唾液的分泌調(diào)節(jié)時，可預(yù)先將唾液腺導(dǎo)管開口移至頰部體表，觀察時就能方便地從體表收集到唾液腺分泌的純凈唾液；研究某種內(nèi)分泌功能時，常先摘除動物某個內(nèi)分泌腺，以便觀察這種內(nèi)分泌激素缺乏時以及人為替代后的生理功能改變，用以了解這種內(nèi)分泌激素的生理作用。慢性動物實驗適用于觀察某一器官或組織在正常情況下的功能以及在整體中的作用地位，但不宜用來分析某一器官

7、或組織細胞生理功能的詳細機制。與急性動物實驗相比，慢性動物實驗的干擾因素較多，實驗條件較難控制。2、鋅銅弓的作用及原理</p><p>　　鋅銅弓：在生理學(xué)實驗中，鋅銅弓是檢驗標本機能活性最常用而簡易的刺激器。由銅片和鋅片兩種金屬制成。鋅銅弓具有刺激作用，是因為金屬與溶液之間產(chǎn)生電位差，即電極電位。</p><p>　　通常將金屬浸入電解質(zhì)溶液中，如Zn便溶解而成Zn離子。而在Zn的里面

8、則形成負離子。Cu在溶液中則相反，金屬與溶液之間便產(chǎn)生了電位差——電極電位。如果將Zn和Cu一端接觸，則在接觸部位電流由Cu向Zn方向流動；而在溶液中則相反，由Zn向Cu流動。當鋅銅弓接觸組織時（注意：表面必須濕潤），電流便沿Zn→可興奮組織→Cu方向流動，而產(chǎn)生流動作用。這樣，鋅銅弓好像一個電池，Zn如同其陽極，Cu好像陰極而發(fā)揮作用。神經(jīng)或肌肉的電刺激閾值非常小，所以僅用鋅銅弓接觸，即可構(gòu)成刺激，以便檢驗組織的機能活性。</p

9、><p>　　3、蟾蜍作為生理學(xué)實驗?zāi)Ｊ缴锏膬?yōu)點</p><p>　　蛙或蟾蜍等兩棲類動物的一些基本生命活動和生理功能與溫血動物相似，而其離體組織生活條件易于掌握，在任氏液的浸潤下，神經(jīng)肌肉標本可較長時間保持生理活性，因此，在生理學(xué)實驗中常用蛙或蟾蜍坐骨神經(jīng)腓腸肌離體標本來觀察神經(jīng)肌肉的興奮性、興奮過程以及骨骼肌收縮特點等。</p><p>　　4、蟾蜍的毀髓及單毀髓

10、和雙毀髓及雙毀髓的意義</p><p>　　蟾蜍破壞腦脊髓：取蟾蜍一只，用自來水沖洗干凈。右手握住蟾蜍，用食指壓住頭部前端使頭前俯，中指、無名指捏住兩前腿，無名指以及小指捏住兩后腿，左手持針，當觸及到兩耳中間的凹陷處時，持針手即感覺針尖下陷，此處即是枕骨大孔的位置。左手持針從枕骨大孔向前刺入顱腔，左右攪動搗毀腦組織，然后將刺蛙針退到枕骨大孔，不拔出而是將其尖轉(zhuǎn)向后插入脊柱管中搗毀脊髓，插入椎管時，蟾蜍后肢立即失去

11、緊張性，多數(shù)情況出現(xiàn)尿失禁。若腦脊髓破壞完全，可見蟾蜍四肢松弛，呼吸消失。</p><p>　　單毀髓：如毀髓針確在顱腔內(nèi)，實驗者可感到針尖觸及顱骨。</p><p>　　雙毀髓：再將毀髓針退至枕骨大孔，針尖轉(zhuǎn)向后方，與脊柱平行刺入椎管，以搗毀脊髓。徹底搗毀脊髓時，可看到動物的后肢突然蹬直，而后癱軟如棉。</p><p>　　雙毀髓的意義：這個實驗主要是探討神經(jīng)纖維

12、沖動產(chǎn)生、興奮傳遞和肌肉收縮之間的關(guān)系，與神經(jīng)中樞無關(guān)。為了制備這個標本需要首先處死青蛙，雙毀髓的意義就在于此，這種雙毀髓的處死方法，簡單易行，關(guān)鍵是相對比較人道。</p><p>　　5、蟾蜍坐骨神經(jīng)－腓腸肌標本的制備</p><p>　　（1）剪除上肢和內(nèi)臟：在骶髂關(guān)節(jié)上0.5～1.0cm處用粗剪刀剪斷脊柱。用鑷子夾住后端脊柱，以剪刀沿脊柱兩側(cè)剪除所有內(nèi)臟及頭胸部，留下后肢、骶骨、后端

13、脊柱及緊貼于脊柱兩側(cè)的坐骨神經(jīng)。</p><p>　?。?）剝皮：左手用鑷子或直接用手捏住脊柱斷端（注意不要壓迫神經(jīng)），右手捏住斷端邊緣皮膚，向下剝?nèi)ト亢笾つw，將標本置于盛有任氏液的培養(yǎng)皿中。</p><p>　?。?）分離兩腿：用玻璃分針沿脊柱兩側(cè)游離出兩條坐骨神經(jīng)，并于近脊柱處各扎一細線，然后在扎線與脊柱之間剪斷神經(jīng)。提著神經(jīng)上的細線，將兩條坐骨神經(jīng)分別置于兩條大腿上，左手持脊柱，

14、將骶骨翹起，將下位脊柱全部剪除。捏著兩側(cè)髂骨向反方向分離，使恥骨聯(lián)合脫臼后，沿恥骨聯(lián)合正中將兩下肢剪開，將一條腿浸于任氏液中備用，另一條置于浸有任氏液的玻璃板上。</p><p>　　（（2）、（3）兩步可變?yōu)橐皇帜笞〖怪蠖?，一手抓著蟾蜍頭部向兩側(cè)拉開，可直接分離兩腿，蟾蜍皮膚仍留在蟾蜍上身部。若試驗中當堂進行坐骨神經(jīng)-腓腸肌興奮性實驗，則不需浸泡入任氏液）</p><p>　?。?）游

15、離坐骨神經(jīng)和剪斷股骨：認清坐骨神經(jīng)溝和腓腸肌的部位，用剪刀剪斷梨狀肌及其周圍的結(jié)締組織，左手提著神經(jīng)上的細線，右手持剪刀或玻璃分針沿坐骨神經(jīng)溝細心剝離，直至將坐骨神經(jīng)剝離到腘窩。將游離干凈的坐骨神經(jīng)放在下腿上，沿膝關(guān)節(jié)的周圍將大腿的所有肌腱剪斷，并用剪刀刮凈股骨下段附著的肌肉，在股骨上1/3處剪去上段股骨及所附的肌肉，這樣制成的稱為坐骨神經(jīng)下腿標本。</p><p>　?。?）游離腓腸肌：在坐骨神經(jīng)下腿標本的基礎(chǔ)

16、上，用剪刀將跟腱的下端剪斷，在跟腱與肌肉交界處扎一條細線，左手提線，右手用剪刀游離腓腸肌，直到膝關(guān)節(jié)。做好的標本用鋅銅弓的兩極輕輕接觸坐骨神經(jīng)，腓腸肌立即收縮，表示標本的興奮性良好。</p><p>　　6、坐骨神經(jīng)干標本的制備和縫匠肌神經(jīng)標本制備</p><p>　　坐骨神經(jīng)干標本的制備：蟾蜍下肢背面向上置于蛙板上，剪去尾椎；標本腹面向上，用玻璃分針分離脊柱兩側(cè)神經(jīng)叢，用線在近脊柱處結(jié)扎

17、，剪斷神經(jīng)；將神經(jīng)干從腹面移向背面。標本背面向上固定，從大腿至跟腱分離坐骨神經(jīng)。坐骨神經(jīng)標本置任氏液中備用。</p><p>　　縫匠肌神經(jīng)標本制備：</p><p>　　縫匠?。何挥诠刹扛箖?nèi)側(cè)面，起于恥骨聯(lián)合，止于脛骨，為一肌纖維平行排列的長條肌肉（圖2-4）?？p匠肌受坐骨神經(jīng)的分支支配。此分支起于梨狀肌的尾骨側(cè)下面，沿途又向半膜肌、半腱肌等發(fā)出分支。并由內(nèi)大收肌和股內(nèi)直肌之間穿過，到達

18、股部腹面。在縫匠肌內(nèi)側(cè)面下1/3處進入肌肉。由于該神經(jīng)在走行沿途中一再分支，到達縫匠肌時已很纖細，解剖時需倍加小心以免傷及神經(jīng)。</p><p>　　制備過程：取一側(cè)下肢，腹位置于蛙板上。找到梨狀肌，將其在尾骨的附著處剪斷。小心分離其下的坐骨神經(jīng)，認清坐骨神經(jīng)在此處發(fā)出的3個分支。在分支的中樞端結(jié)扎坐骨神經(jīng)，并在結(jié)扎線的中樞端以及3個分支的外周端剪斷坐骨神經(jīng)。輕輕提起結(jié)扎線，細心地對3個分支略加分離，確認從內(nèi)直肌

19、和半腱肌之間進入大腿腹面的一支，注意：此分支為支配縫匠肌的神經(jīng)。再將其它兩個分支自坐骨神經(jīng)起始處剪斷，將保留的一支神經(jīng)置于由任氏液濕潤的棉球下以保護之。</p><p>　　翻轉(zhuǎn)下肢標本，將其背位置于蛙板上，找到縫匠肌。用尖鑷子在其脛骨附著點腱膜下開一小孔，穿線結(jié)扎。提起結(jié)扎線，用手術(shù)剪將結(jié)扎線外側(cè)的腱膜剪斷。</p><p>　　輕輕提起結(jié)扎線，用眼科剪沿縫匠肌外側(cè)緣仔細剪開肌膜，直至縫

20、匠肌在恥骨聯(lián)合的附著處。為保護肌纖維，可在附著處剪下少量恥骨。</p><p>　　用玻璃解剖針將縫匠肌以內(nèi)側(cè)緣為軸翻轉(zhuǎn)180°，使其內(nèi)表面向上，即可清楚地看到支配肌肉的神經(jīng)在其下1/3的內(nèi)側(cè)緣進入肌肉。隨后將肌肉翻正復(fù)原，用眼科剪沿內(nèi)側(cè)緣由前向后剪開肌膜。注意：留下約2mm神經(jīng)進入處的肌膜，以便在下一步操作中保護神經(jīng)不被牽拉。</p><p>　　用玻璃解剖針分離內(nèi)大收肌和股內(nèi)

21、直肌，將在背面已分離的神經(jīng)由分離處穿至腹面，在此過程中需將支配其它肌肉的神經(jīng)分支一一剪斷。注意：勿傷及支配縫匠肌的神經(jīng)，這樣即可把坐骨神經(jīng)-縫匠肌分離出來。用鑷子分別夾住恥骨和結(jié)扎線。將標本移至盛有任氏液的培養(yǎng)皿內(nèi)，用鋅銅弓檢查標本。</p><p>　　7、手術(shù)剪的分類及剪刀的技用</p><p>　　手術(shù)剪的分類：根據(jù)其結(jié)構(gòu)特點有尖、鈍，直、彎，長、短各型。據(jù)其用途分為組織剪、線剪及拆

22、線剪。組織剪多為彎剪，銳利而精細用來解剖、剪斷或分離剪開組織。通常淺部手術(shù)操作用直剪，深部手術(shù)操作用彎剪。如圖1~7。線剪多為直剪，用來剪斷縫線、敷料、引流物等。如圖1~8。線剪與組織剪的區(qū)別在于組織剪的刃銳薄，線剪的刃較鈍厚。所以，決不能圖方便、貪快，以組織剪代替線剪，以致?lián)p壞刀刃，造成浪費。拆線剪是一頁鈍凹，一頁直尖的直剪，用于拆除縫線，如圖1~9。正確持剪刀法為拇指和第四指（無名指）分別插入剪刀柄的兩環(huán)，中指放在第四指環(huán)的剪刀柄上

23、，食指壓在軸節(jié)處起穩(wěn)定和向?qū)ё饔谩?lt;/p><p>　　正確持剪刀法：為拇指和第四指（無名指）分別插入剪刀柄的兩環(huán)，中指放在第四指環(huán)的剪刀柄上，食指壓在軸節(jié)處起穩(wěn)定和向?qū)ё饔谩?lt;/p><p><b>　　三、實驗器材</b></p><p>　　實驗動物：蟾蜍1只/組</p><p>　　實驗設(shè)備：低等動物手術(shù)器械，鋅

24、銅弓，解剖盤等</p><p><b>　　四、實驗步驟</b></p><p>　　1、掌握單毀髓和雙毀髓的方法及生理意義</p><p>　　2、掌握坐骨神經(jīng)-腓腸肌標本的制備</p><p>　　3、縫匠肌神經(jīng)標本的制備</p><p>　　4、坐骨神經(jīng)干標本的制備</p>&

25、lt;p>　　5、掌握剪刀的技用和標本的檢驗</p><p>　　6、掌握動物尸體的處理方法和保護方法</p><p><b>　　五、結(jié)果與分析</b></p><p>　　1、蟾蜍坐骨神經(jīng)-腓腸肌標本制作如下圖：</p><p>　　鋅銅弓刺激坐骨神經(jīng)，則能感到用細線結(jié)扎的腓腸肌的肌肉收縮。</p>

26、<p>　　2、試驗中應(yīng)注意的事項：</p><p>　　（1）、避免蟾蜍體表毒液和血液污染標本，不可用金屬器械觸碰神經(jīng)干。</p><p>　?。?）、操作過程中避免污染、損傷、過度牽拉神經(jīng)和肌肉。</p><p>　?。?）、在操作過程中，應(yīng)防止標本表面干燥，用水或任氏液潤濕，以免影響標本的興奮性。</p><p>　?。?