紅樹(shù)林沉積物的真菌多樣性及其代謝產(chǎn)物的生物活性研究.pdf

1、紅樹(shù)林是指自然分布在熱帶、亞熱帶海岸潮間帶的木本植物群落,通常生長(zhǎng)在港灣河口地區(qū)淤泥質(zhì)灘涂上。紅樹(shù)林沉積物具有強(qiáng)酸性、強(qiáng)還原性、高有機(jī)質(zhì)、高含鹽量等特征,蘊(yùn)含著極為豐富、極具特色的微生物資源。然而,目前對(duì)紅樹(shù)林的研究多集中在植物學(xué)、生態(tài)學(xué)、造林學(xué)等領(lǐng)域,在紅樹(shù)林沉積物真菌的研究甚少。紅樹(shù)林沉積物真菌是一個(gè)重要的生物資源庫(kù),是農(nóng)業(yè)、醫(yī)學(xué)和工業(yè)所需新型天然活性物質(zhì)的重要來(lái)源。
　　本研究以福建漳江口紅樹(shù)林國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)紅樹(shù)林沉積物為

2、研究對(duì)象,利用可培養(yǎng)分離法研究紅樹(shù)林沉積物中真菌類群組成多樣性,并利用平板共滯法進(jìn)行抗茶葉病原真菌的活性篩選,CCK8 法進(jìn)行腫瘤細(xì)胞毒活性篩選。同時(shí)通過(guò)人工誘變方法對(duì)茶葉病原真菌Pestalotiopsis theae進(jìn)行致病缺陷誘變。
　　通過(guò)對(duì)8個(gè)樣品分離培養(yǎng)得到1276株,初步整理為135株真菌,通過(guò)形態(tài)學(xué)和Internal Transcribed Spacer of ribosomal DNA(ITSrDNA)序列測(cè)定進(jìn)

3、行鑒定,并建立了系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)進(jìn)行多樣性分析分析,子囊菌門真菌占據(jù)紅樹(shù)林沉積物真菌群落的絕大部分(91.5％),而擔(dān)子菌門占2.1%,接合菌門占6.4%。所得真菌歸為47個(gè)種系型,分屬于17個(gè)屬,其中青霉屬和曲霉屬為優(yōu)勢(shì)菌屬,總樣品的Shannon-Wiener 和 Simpson 多樣性指數(shù)為 4.01和0.901,均勻度為0.795,顯示出豐富的多樣性；利用平板共滯法對(duì)真菌代謝產(chǎn)物進(jìn)行抗茶葉病原真菌生物活性實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：共有 22 株(占

4、46.8%)具抗真菌活性,活性菌中抑制Pestalotiopsis theae LH13的真菌17株,抑制Colletotrichum gloeosporioides LH30的真菌14株,抑制Neofusicoccum sp. LH107的真菌9株。這些菌株分布在7個(gè)屬,其中以青霉屬、鐮孢屬、木霉屬、曲霉屬為主。用 CCK8 法檢測(cè) 47 株紅樹(shù)林沉積物來(lái)源真菌發(fā)酵液粗提物的細(xì)胞毒活性,以 100μg/ml的濃度下抑制率大于 70%為

5、陽(yáng)性為判斷標(biāo)準(zhǔn),統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性率14-19%,其中BEL7402(肝癌)陽(yáng)性6株、HT1080(纖維肉瘤)陽(yáng)性9株、Hl60(急性早幼粒細(xì)胞白血病)陽(yáng)性7株。以孢子致死率70-85%為依據(jù)對(duì)Pestalotiopsis theae LH13進(jìn)行紫外誘變,通過(guò)健康茶葉葉片致病性實(shí)驗(yàn)篩選出致病缺陷型菌株3株和減毒株19株。
　　本文的研究工作對(duì)探明海洋真菌在我國(guó)紅樹(shù)林生態(tài)系統(tǒng)的群落結(jié)構(gòu),有效利用和保護(hù)紅樹(shù)林微生物資源,開(kāi)發(fā)新型藥物先導(dǎo)化