對蝦餌料生物攜帶WSSV的風險評估及紅肉河藍蛤?qū)Ψ布{濱對蝦抗病力的影響.pdf

1、對蝦白斑綜合征（white spot syndrome，WSS）是對蝦養(yǎng)殖中最主要的病毒性疾病，因其高傳播性、高致病性、高死亡率，對對蝦產(chǎn)業(yè)的發(fā)展造成了巨大的阻礙。目前為止，尚缺乏有效的治療方法，一般采取以防為主的策略。因此，建立高效、健康的生態(tài)養(yǎng)殖模式和提高對蝦自身的抗病力是有效應對WSSV感染和傳播的重要手段。天然餌料生物被認為能夠提高對蝦的抗病力，紅肉河藍蛤的研究尚未見報道；并且天然餌料生物也存在攜帶和傳播WSSV的風險，關于攜帶

2、的含量及強度還未有研究。所以，本論文針對上述問題主要設計了以下實驗內(nèi)容：
　　1、北方沿海地區(qū)不同季節(jié)餌料生物攜帶WSSV的情況及傳播風險評估
　　本實驗于2011年9月以及2012年4月、7月、9月，分4次分別對北方遼寧、天津、河北、山東、江蘇“四省一市”的大連、漢沽、唐山、膠州、東營、海陽、連云港7個地區(qū)的鉤蝦、蜾蠃蜚、藍蛤、擬沼螺、鹵蟲、紅線蟲等對蝦餌料生物進行樣品采集，采用Taqman熒光定量PCR方法檢測餌料生物攜

3、帶WSSV含量。
　　實驗結果表明，北方7個地區(qū)對蝦餌料生物攜帶WSSV是普遍存在的，所有餌料生物均攜帶病毒，但是物種之間存在明顯差異。沙蠶攜帶WSSV量最高，藍蛤最低，擬沼螺攜帶WSSV量略高于藍蛤，但都在同一數(shù)量級；蜾蠃蜚攜帶WSSV量高于鉤蝦，鹵蟲攜帶較低量的WSSV。各地區(qū)餌料生物攜帶WSSV量隨季節(jié)呈現(xiàn)變化規(guī)律，7月份病毒量最高，4月與9月較低。通過對餌料生物攜帶WSSV含量的檢測，初步劃分了4個等級（WSSV量單位為c

4、opy/mg tissue）：1級0～103為潛伏感染；2級104～105為中度感染；3級106～107為重度感染；4級108及以上WSSV爆發(fā)。本研究中所有餌料生物在4月份攜帶WSSV量為102和103數(shù)量級，為1級輕度潛伏感染狀態(tài)；7月份為104或105數(shù)量級，為2級中度感染狀態(tài)；9月份為103或104數(shù)量級，部分餌料生物為1級輕度潛伏感染，部分餌料生物為2級中度感染。
　　2、投喂紅肉河藍蛤?qū)Ψ布{濱對蝦生長、免疫指標和抗病力

5、的影響
　　以凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei）為研究對象，設計了飼料組、藍蛤組、混合組及勻漿組4個處理以探討投喂紅肉河藍蛤（Potamocorbula rubromuscula Zhang et Cai）對凡納濱對蝦生長、免疫指標和抗病力的影響。
　　結果顯示，混合投喂和勻漿投喂的對蝦生長速率顯著高于投喂人工配合飼料（P<0.05），但單獨投喂藍蛤的對蝦生長速率較低（P＞0.05），各處理間對蝦存活率差

6、異不顯著（P＞0.05）。30天時，投喂藍蛤和勻漿飼料可顯著提高對蝦的SOD和抗菌活力（P<0.05），混合投喂可顯著提高對蝦POD、PO和抗菌活力（P<0.05）；60天后，投喂藍蛤可顯著提高對蝦血清POD和PO活力（P<0.05），混合投喂可顯著提高對蝦血清的POD和SOD活力（P<0.05），投喂勻漿飼料的對蝦各項免疫指標和飼料組無顯著性差異（P＞0.05）。采用Taqman熒光定量PCR檢測發(fā)現(xiàn)，投喂的藍蛤攜帶5.32×102

7、copy/mg tissue WSSV，實驗期間，對蝦亦攜帶102～103數(shù)量級WSSV，60天后飼料組對蝦攜帶WSSV量顯著高于其它處理組（P<0.05）。攻毒實驗結果顯示，藍蛤組半致死時間LT50比飼料組延長24％，且藍蛤組免疫保護率顯著高于混合組和勻漿組（P<0.05）；當對蝦開始出現(xiàn)死亡時，對蝦攜帶WSSV病毒量超過106copy/mg tissue，藍蛤組對蝦可以耐受WSSV病毒量最高，達到8.5×108copy/mg tis

8、sue。
　　研究結果表明，鮮活藍蛤和人工配合飼料的搭配使用以及藍蛤軟體部組織制成的勻漿飼料均能促進凡納濱對蝦的生長，但勻漿飼料應妥善保存；投喂藍蛤能夠一定程度上提高對蝦非特異性免疫水平，降低潛伏感染對蝦WSSV增值速率，增強急性感染對蝦抵抗WSSV的能力。
　　3、飼料中添加芽孢桿菌對凡納濱對蝦生長、免疫指標和抗病力的影響
　　本實驗研究了在配合飼料中添加108CFU/g芽孢桿菌 Z5株對凡納濱對蝦生長、免疫指標和抗

9、病力的影響。實驗結果顯示：芽孢桿菌組對蝦生長速度較快，成活率顯著提高，比對照組提高了24%的產(chǎn)量。飼喂21d后，芽孢桿菌組對蝦血清PO活力顯著升高；42d后，芽孢桿菌組對蝦血清PO、POD和SOD活力均顯著升高。攻毒結果表明，芽孢桿菌組對蝦半數(shù)致死時間比對照組延長了35%。表明飼料添加芽孢桿菌能夠提高對蝦成活率，增強機體免疫功能，提高對蝦抗病能力。
　　4、紅肉河藍蛤與芽孢桿菌的協(xié)同作用對凡納濱對蝦抗病力的影響
　　本實驗主

10、要采用15N人工標記的方法研究了紅肉河藍蛤濾食芽孢桿菌的同化及累積效果；養(yǎng)殖實驗設置5個處理組，各設6個平行。飼料組：只投喂配合飼料；藍蛤組：只投喂藍蛤；藍蛤+水菌組：投喂藍蛤，水體中加入106CFU/ml芽孢桿菌，每2天換水1次，換水量為1/2，每次換水補充新的芽孢桿菌；藍蛤+活菌組：投喂濾食芽孢桿菌的藍蛤；藍蛤+破碎菌組：投喂濾食破碎芽孢桿菌的藍蛤。探討了協(xié)同作用對凡納濱對蝦生長、免疫指標和抗病力的影響。
　　結果顯示，藍蛤能

11、夠利用芽孢桿菌，同化率為29.88%；另有部分細菌只是過路菌，藍蛤能夠攜帶芽孢桿菌率為18.15%。對蝦攝食藍蛤5天后，組織內(nèi)對藍蛤的同化率達到46.72%，腸道對芽孢桿菌的同化和定植率為0.24%。表明藍蛤能夠利用及攜帶芽孢桿菌，芽孢桿菌通過芽孢桿菌-藍蛤-對蝦食物鏈體系的遷移與利用作用，最終可能在對蝦腸道內(nèi)定植。
　　飼料組對蝦成活率顯著低于其它4組實驗組（P<0.05）。藍蛤組+水菌組以及藍蛤+活菌組的對蝦血清過氧化物酶活力