Vasa、卵泡抑素(FST)和抗繆勒氏管激素(AMH)在半滑舌鰨繁殖周期中的作用研究.pdf

1、半滑舌鰨(Cynoglossus semilaevis Günther)是我國近海的大型名貴經(jīng)濟(jì)魚類。本研究利用分子生物學(xué)和mRNA原位雜交技術(shù),分析了Vasa、卵泡抑素(follistatin,FST)、抗繆勒氏管激素(anti-mullerian hormone,AMH)在半滑舌鰨繁殖周期中的功能,所得結(jié)果與結(jié)論如下:
　　1.半滑舌鰨Vasa基因的克隆和表達(dá)
　　本研究克隆了半滑舌鰨Vasa基因的cDNA序列,其全長2

2、602bp,編碼包含722個(gè)氨基酸殘基的蛋白質(zhì),有一個(gè)經(jīng)選擇性剪切形成的亞型。推導(dǎo)的氨基酸序列含有DEAD-box家族特有的8個(gè)保守,N末端含有5個(gè)RGG重復(fù)和10個(gè)RG重復(fù)。組織表達(dá)分析表明,Vasa基因在性腺中表達(dá)量豐富,性腺外組織僅在心臟中有微量表達(dá)。
　　利用RT-PCR和mRNA原位雜交技術(shù)研究了csVasa在性成熟半滑舌鰨繁殖周期的表達(dá)模式。在卵巢中,Vasa的表達(dá)量在初級(jí)卵黃期和囊泡期要顯著高于核周期和退化吸收期;精

3、巢中,Vasa在精子細(xì)胞增殖期的表達(dá)量要明顯高于精母細(xì)胞增殖期和精子成熟期。這些結(jié)果表明,Vasa可能在半滑舌鰨的配子發(fā)生中起重要作用。初級(jí)卵黃期卵巢的Vasa mRNA原位雜交結(jié)果顯示,Vasa mRNA在Ⅲ期卵母細(xì)胞的胞質(zhì)中均勻分布,外周皮層信號(hào)強(qiáng)度較高。
　　2.半滑舌鰨FST基因的克隆和表達(dá)
　　采用RACE技術(shù)克隆得到了半滑舌鰨FST的cDNA序列,其全長1455bp,編碼包含321個(gè)氨基酸殘基的蛋白質(zhì),屬于TGF

4、B家族。組織表達(dá)分析表明,FST、在半滑舌鰨13中組織中均有表達(dá),其中在性腺中表達(dá)最高,腦和鰓中表達(dá)量較高,證明FST具有廣泛的生理作用。
　　利用RT-PCR技術(shù)研究了FST在性成熟半滑舌鰨繁殖周期的表達(dá)模式。在卵巢中,FST的表達(dá)量核周期最高,初級(jí)卵黃期和囊泡期較高,推測FST抑制FSH刺激的卵母細(xì)胞發(fā)育的作用,而對(duì)LH無明顯作用;精巢中,FST在各個(gè)時(shí)期均有表達(dá),并且精子細(xì)胞增殖期表達(dá)量較低,推測這是因?yàn)镕ST對(duì)芳香化酶的調(diào)

5、節(jié)功能所致。
　　3.半滑舌鰨AMH基因的克隆和表達(dá)
　　采用RT-PCR技術(shù)克隆得到了半滑舌鰨AMH的cDNA片段序列,長度955bp,編碼318個(gè)氨基酸,屬于TGFβ家族。組織表達(dá)分析表明,AMH在僅半滑舌鰨的性腺中表達(dá),并且在精巢中的表達(dá)量要高于卵巢。
　　利用RT-PCR技術(shù)研究了AMH在性成熟半滑舌鰨繁殖周期的表達(dá)模式。在卵巢中,AMH在初級(jí)卵黃期和囊泡期表達(dá)量較高,在退化吸收期最高,推測魚類的AMH與哺乳類