查爾酮合酶基因RNAi表達(dá)載體構(gòu)建及矮牽牛遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、 本文利用短干涉RNA(siRNA)進(jìn)行了矮牽牛查爾酮合成酶(CHS)基因短干涉RNA片段表達(dá)載體的構(gòu)建，研究了矮牽牛再生體系和基因槍介導(dǎo)、農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化體系，并進(jìn)行矮牽牛CHS基因的RNAi載體轉(zhuǎn)化研究。得到如下結(jié)果： 1.構(gòu)建了兩個(gè)抑制矮牽牛查爾酮合成酶(CHS)基因表達(dá)的RNAi表達(dá)載體pBI121-CHS。 2.建立了成熟的矮牽牛再生體系。通過(guò)正交試驗(yàn)，研究了不同激素水平下對(duì)矮牽牛再生體系的誘導(dǎo)效應(yīng)，確

2、定誘導(dǎo)愈傷組織的最適宜培養(yǎng)基。通過(guò)矮牽牛對(duì)照株對(duì)不同濃度Kan的敏感性試驗(yàn)，得出適宜的篩選濃度為80mg/L。利用此濃度，可對(duì)轉(zhuǎn)化后矮牽牛植株進(jìn)行抗性篩選。 4.初步建立了基因槍介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因體系。研究了不同轟擊距離和次數(shù)對(duì)轉(zhuǎn)化效果的影響，確定了適宜的基因槍轟擊參數(shù)為轟擊距離。 5.初步建立農(nóng)桿菌葉盤(pán)法介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因體系。研究了不同農(nóng)桿菌菌液濃度和侵染時(shí)間對(duì)矮牽牛無(wú)菌苗葉盤(pán)分化率的影響，確定適宜的菌液感染濃度OD600=0.5