鋁誘導(dǎo)不同耐鋁型桉樹優(yōu)良無性系葉片mRNA差異顯示分析.pdf

1、桉樹(Eucalyptus)是我國(guó)南方重要的速生用材樹種,絕大多數(shù)是人工純林。我國(guó)南方土壤是富鋁化酸性土壤,酸雨、作物連作及施用肥料等原因更加劇了土壤酸化程度,森林土壤酸化導(dǎo)致的鋁毒害是造成森林衰退的因素之一。探討酸性土壤上速生桉的耐鋁分子機(jī)理,對(duì)于選育耐鋁速生桉品系具有重要的參考意義。
　　本實(shí)驗(yàn)以桉樹組培苗為材料,利用優(yōu)化了的mRNA差異顯示技術(shù),對(duì)耐鋁型無性系巨尾桉9號(hào)和鋁敏感型無性系尾葉桉4號(hào)在鋁脅迫處理下的基因表達(dá)差異進(jìn)

2、行了研究,并對(duì)獲得的若干差異片段進(jìn)行回收、克隆、測(cè)序及同源性比對(duì)。得出以下結(jié)果:
　　(1)利用天根(Tiangen)植物總RNA提取試劑盒獲得了質(zhì)量高、完整性好的桉樹葉片總RNA,完全適用于DDRT-PCR,是一種快速、可靠的桉樹葉片組織總RNA提取方法。
　　(2)通過用正交方法對(duì)RT-PCR體系中TaqDNA聚合酶、dNTP的濃度及退火溫度三個(gè)關(guān)鍵因素進(jìn)行優(yōu)化,得出TaqDNA聚合酶0.2μl、dNTP濃度1μl、退火

3、溫度28℃為本次實(shí)驗(yàn)最佳的反應(yīng)體系。
　　(3)通過對(duì)3條錨定引物(SP1、SP2、SP3)和7條隨機(jī)引物(RP1、RP2、RP3、RP4、RP5、RP6、S16)的組合篩選,結(jié)果表明SP2這一錨定引物與7條隨機(jī)引物組合擴(kuò)增出來的條帶多態(tài)性最明顯,條帶清晰度最佳。
　　(4)在兩個(gè)無性系mRNA差異片段分析結(jié)果中,耐鋁型無性系G9共得到35條差異條帶,鋁脅迫敏感型無性系W4共得到22條差異條帶。表明兩個(gè)無性系在鋁脅迫下發(fā)生了

4、明顯的差異表達(dá)。
　　(5)兩個(gè)桉樹無性系BLAST搜索同源性比對(duì)結(jié)果得出,在耐鋁型無性系G9中 G9_21_1基因片段與桃金娘科桉屬植物葉綠體基因同源性為100％。G9_24_1序列與楊樹(populus)耐旱相關(guān)基因同源性為77%。G9_9_4序列與可可中的過氧化物酶基因有85%的同源性。序列片段G9_35_1與狼尾草(Pennisetum alopecuroides)和鹽角草(Salicornia europaea)中的熱休

5、克蛋白基因同源性分別達(dá)到90%和91%。序列G9_15_2與可可(Theobroma cacao)中的乙二醛酶基因片段同源性達(dá)82%。這5個(gè)與逆境脅迫相關(guān)的基因片段均來自經(jīng)鋁脅迫處理的植株,且有些片段的表達(dá)量隨著脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸增加。另外,G9_16_1序列與長(zhǎng)春花(Catharanthus roseus)的環(huán)烯醚萜苷類葡糖基轉(zhuǎn)移酶上的基因片段同源性達(dá)85%,它也屬于抗脅迫基因但在耐鋁型無性系G9鋁脅迫植株中其表達(dá)被抑制。