熱加工處理轉Bt水稻基因的降解及其檢測研究.pdf

1、在我國自主轉Bt基因水稻快速發(fā)展的背景下，針對目前對其在加工品中的檢測還沒有系統(tǒng)研究的情況下，本研究利用外源模擬熱加工的方法，選取我國目前幾個成熟的轉Bt基因水稻作為研究對象，研究適合含有米質品加工品的DNA提取方法，并研究轉Bt基因水稻不同加工過程內(nèi)、外源基因及Bt蛋白含量的降解規(guī)律，建立相應的檢測技術，完善加工品轉基因成份的檢測規(guī)程，為轉基因成份的檢測和溯源提供技術支持，對于轉基因生物安全監(jiān)管具有重要意義。主要研究結果如下：

2、　　1.DNA提取方法研究：本實驗對比了5種不同方法提取轉Bt基因水稻（Bt-ZJ22）及含有米質品的加工品DNA的效果。以確定適合轉基因水稻及其加工品DNA的提取方法，為后續(xù)建立轉基因水稻及其加工品的PCR檢測方法莫定基礎。結果顯示CTAB法和堿處理法所提取的DNA得率較高；在純度上5種方法相差不大；瓊脂糖凝膠電泳檢測5種方法提取的DNA完整性顯示所有樣品提取的DNA均嚴重降解；在以水稻內(nèi)標準基因SPS進行PCR擴增時，Wizardk

3、it法擴增效果最好，能夠滿足PCR定性鑒定的需要，而且提取過程簡單、快速。綜合考慮，Wizardkit法更適合于轉基因水稻及其加工品PCR檢測中DNA模板的制備。
　　2.熱加工處理對轉Bt基因水稻內(nèi)外源基因的影響：采用高溫滅活、水煮、高溫烘干和微波4種外源模擬熱加工的方法處理3種轉Bt基因水稻（KMD1、TT51-1和KF6），按照國家標準對水稻內(nèi)標準基因SPS、調(diào)控元件CaMV35S啟動子和NOS終止子、外源基因Bt進行定性P

4、CR檢測，研究目前對這三種轉基因水稻的檢測方法是否適合檢測其在加工品中的成份。并針對轉Bt基因水稻外源基因各個片斷（Cry1Ab、Cry1Ac、Cry1Ab/Cry1Ac等）利用引物設計軟件PrimerPremier5.0設計相應的引物，對水稻內(nèi)源SPS基因和外源Bt基因進行不同大小片段的PCR擴增，了解轉Bt基因水稻在模擬熱加工過程中內(nèi)、外源基因的降解規(guī)律，尋找外源基因在加工品中的穩(wěn)定區(qū)域。研究結果表明，三種Bt基因在熱處理過程中的降

5、解情況不盡相同。熱加工過程無論對內(nèi)源基因和外源插入基因的檢測都有影響，轉基因水稻中的各種外源成分在不同加工條件下穩(wěn)定性不同。本文新設計的引物可以成功的用于轉基因水稻及其加工產(chǎn)品的檢測。
　　3.熱加工處理對轉Bt基因水稻蛋白含量的影響：實驗中采用ELISA方法測定了不同熱加工處理轉Bt基因水稻種子中Bt蛋白的表達水平及蛋白含量，結果顯示微波和180℃烘干處理仍能檢測出Bt蛋白；高溫滅活處理在TT51-1和KF6中能檢測到極少量的蛋