小鼠Zfy基因RNAi病毒載體的構(gòu)建及性控效果的觀察.pdf

1、本研究采用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體介導(dǎo)的RNAi技術(shù)靶向抑制性別決定相關(guān)基因Zfy的表達(dá),研究Zfy基因在生精過程中的相關(guān)功能及小鼠后代性別比例的變化。通過構(gòu)建逆轉(zhuǎn)錄病毒載體Retrovirus/Zfy-shRNA和質(zhì)粒載體Psilencer/Zfy-shRNA,用構(gòu)建好的病毒載體和質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染小鼠生精細(xì)胞,應(yīng)用qRT-PCR檢測各組細(xì)胞中Zfy基因的mRNA表達(dá)水平,驗(yàn)證干擾載體對Zfy基因的沉默效應(yīng)。大量包裝生產(chǎn)病毒顆粒和制備質(zhì)粒載體并對公鼠

2、進(jìn)行睪丸打點(diǎn)注射,每隔7d注射1次,連續(xù)注射4次,最后一次注射14d后,部分雄鼠宰殺采集睪丸組織,qRT-PCR檢測Zfy基因的表達(dá)水平;另一部分雄鼠與每組超排處理的雌鼠按1:1合籠,間隔5d合籠1批雌鼠,共合籠3批,觀察后代的性別比例。
　　結(jié)果顯示,逆轉(zhuǎn)錄病毒Retrovirus/Zfy-shRNA和質(zhì)粒載體Psilencer/Zfy-shRNA轉(zhuǎn)染小鼠生精細(xì)胞后,Zfy基因mRNA表達(dá)水平都極顯著低于空載體對照組和空白對照組

3、(P<0.01),兩對照組之間無差異顯著性(P>0.05);睪丸注射逆轉(zhuǎn)錄病毒Retrovirus/Zfy-shRNA和質(zhì)粒載體Psilencer/Zfy-shRNA后,Zfy基因mRNA表達(dá)水平都極顯著低于空載體組和生理鹽水組(P<0.01),兩對照組之間無差異顯著性(P>0.05);睪丸注射逆轉(zhuǎn)錄病毒載體Retrovirus/Zfy-shRNA的雄鼠組間隔5d交配1次,得到第1次交配出生的后代平均雌鼠率為71.43％,極顯著高于空載

4、體對照組(P<0.01),顯著高于生理鹽水對照組(P<0.05),第2、3次交配的后代平均雌鼠率逐漸降低,與對照組相比差異不顯著(P>0.05);睪丸注射質(zhì)粒載體Psilencer/Zfy-shRNA的雄鼠組間隔5d交配1次,得到第1、2次交配出生的后代平均雌鼠率分別為71.00%和73.21%,都極顯著高于空載體對照組(P<0.01),都顯著高于生理鹽水對照組(P<0.05);第3次交配的后代平均雌鼠率為63.64%,顯著高于空載體對