KAP6,KAP7和KAP8基因作為羊毛分子標(biāo)記的初步研究.pdf

1、羊毛是重要的畜牧業(yè)產(chǎn)品之一,也是重要的紡織工業(yè)原材料。羊毛的品質(zhì)主要表現(xiàn)在羊毛的細(xì)度和卷曲度上,隨著羊毛紡織技術(shù)的不斷提高和人們對(duì)自然、高檔、輕薄和柔軟服飾的追求,直徑在21.5μm以下的細(xì)羊毛的需求量顯著增加。近些年來,我國的羊毛產(chǎn)量雖然不斷增長但是高品質(zhì)羊毛產(chǎn)量不足,羊毛質(zhì)量參差不齊,羊毛進(jìn)口量逐年攀升。因此,培育出產(chǎn)高品質(zhì)、高產(chǎn)量羊毛的綿羊品種成為綿羊育種的時(shí)代需求,分子標(biāo)記育種是實(shí)現(xiàn)高品質(zhì)綿羊育種的重要輔助手段,能夠大大加快育種

2、進(jìn)程。
　　鑒于此,本論文以中國五個(gè)綿羊品種(中國美利奴、薩克福、湖羊、羅姆尼、中國美利奴×湖羊)作為研究對(duì)象,采用分子生物學(xué)技術(shù)手段研究與羊毛細(xì)度相關(guān)的候選基因(KAP6, KAP7和KAP8基因)在不同品種綿羊皮膚中的表達(dá)量,分析基因的編碼區(qū)及其側(cè)翼序列的多態(tài)性并用染色體步移法克隆其上游未知序列,最后對(duì)編碼區(qū)上游序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析。從而在轉(zhuǎn)錄水平和基因組水平上探討羊毛品質(zhì)候選基因的多態(tài)性與羊毛直徑品質(zhì)間的關(guān)系,為細(xì)毛羊育種

3、提供理論參考。結(jié)果總結(jié)如下:
　　(1)KAP6, KAP7和KAP8基因在毛囊組織中的表達(dá)采用熒光實(shí)時(shí)定量PCR(Real-time Quantity PCR,RQ-PCR)檢測KAP6, KAP7和 KAP8基因在薩?？搜?粗毛羊)和中國美利奴羊(細(xì)毛羊)皮膚毛囊中的表達(dá)水平。結(jié)果表明,mRNA表達(dá)量和羊毛直徑高度正相關(guān),相關(guān)系數(shù)分別為0.941(P=0.00)、0.842(P=0.01)和0.948(P=0.00);三個(gè)基因

4、在薩?？搜蚱つw組織中的表達(dá)量顯著高于在中國美利奴羊皮膚組織中的表達(dá)量,分別達(dá)到4.23、5.74和5.87倍。
　　(2)四個(gè)綿羊品種KAP6, KAP7和KAP8基因的克隆及其多態(tài)性研究用PCR技術(shù)擴(kuò)增綿羊KAP6, KAP7和KAP8基因,采用直接測序和載體克隆測序技術(shù),檢測其在中國美利奴羊、湖羊、羅姆尼羊和美利奴-湖羊雜交羊中四個(gè)群體的多態(tài)性。結(jié)果發(fā)現(xiàn),KAP6基因檢測到六種多樣性序列,KAP7基因檢測到兩種多樣性序列,KA

5、P8基因檢測到五種多樣性序列。在KAP7基因位點(diǎn)發(fā)現(xiàn)的兩個(gè)品種特異性序列和一個(gè)品種特異性SNP點(diǎn)值得深入研究。
　　(3)KAP6, KAP7和KAP8基因上游序列的擴(kuò)增及其生物信息學(xué)分析根據(jù)GenBank的KAP6, KAP7和KAP8基因的序列設(shè)計(jì)特異性引物,采用TAIL-PCR(交錯(cuò)式熱不對(duì)稱PCR,thermal asymmetric interlaced PCR)分別克隆獲得三個(gè)基因5′未知序列片段,然后通過PCR克隆測

6、序的方法分別得到KAP6, KAP7和KAP8基因CDS區(qū)上游未知序列1877bp、3224bp和1826bp的核酸序列信息。然后用DNAman序列分析軟件將測得的未知序列與GenBank中已知序列拼接,分別得到KAP6, KAP7和KAP8基因CDS區(qū)上游2918bp,3619bp和2801bp長的片段。對(duì)上游序列采用生物信息學(xué)分析軟件Genomatrix分析,得到的結(jié)果進(jìn)行生物信息學(xué)預(yù)測發(fā)現(xiàn)了一些調(diào)控元件的結(jié)合位點(diǎn),為進(jìn)一步分析KA