綠僵菌ENA P型-ATPase基因MaENA1的克隆與功能研究.pdf

1、昆蟲病原真菌廣泛的存在于自然界,并且分布在多種生態(tài)系統(tǒng)中。在全球范圍內(nèi),從北極到熱帶地區(qū)都有昆蟲病原真菌的分布。它們?cè)诳刂谱匀幌x害方面有應(yīng)用普遍與廣泛之特點(diǎn),具有相當(dāng)大的應(yīng)用潛力與發(fā)展前景。在近二十年的時(shí)間內(nèi),對(duì)殺蟲真菌的研究取得了許多新進(jìn)展,也使得昆蟲病原真菌成為真菌類生防制劑的重要組成部分。如果將昆蟲病原真菌作為高效殺除害蟲的生防劑來(lái)應(yīng)用,就需要在田間施用中能夠維持其孢子的活力與毒力。高溫高滲、太陽(yáng)紫外輻射以及殺真菌噴霧劑這些田間施

2、用環(huán)境,對(duì)于細(xì)胞的生存活力以及致病侵染力都是不利的,從而抑制了真菌生防劑的穩(wěn)定性以及對(duì)害蟲的控制力。因此這就需要我們從各個(gè)方面研究與改進(jìn)真菌生防劑。綠僵菌屬種類的昆蟲病原真菌作為對(duì)環(huán)境無(wú)害的殺蟲劑,相比于化學(xué)殺蟲劑具有較大的優(yōu)勢(shì),同時(shí)也可把它作為一種模式系統(tǒng),用來(lái)研究昆蟲-真菌的相互作用,并作為生物技術(shù)的基因資源。
　　已知綠僵菌對(duì)逆境的耐受性對(duì)于其生產(chǎn)以及應(yīng)用的重要性,而ENA ATPase通過(guò)大量的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)它可以對(duì)高滲透壓

3、的逆境產(chǎn)生應(yīng)答,也發(fā)現(xiàn)它可能與一些與逆境相關(guān)的通路有聯(lián)系,即HOG pathway、Ca2+調(diào)控通路、TOR通路等MAPK通路,這些通路中的許多節(jié)點(diǎn)基因都與ENA1相關(guān),它們之間也存在著維持平衡、相互影響的關(guān)系。但這些研究大都在酵母中、人類病原真菌、苔蘚植物中進(jìn)行,至今沒(méi)有昆蟲病原真菌中ENA1基因的相關(guān)研究與報(bào)導(dǎo),因此我們的研究為發(fā)現(xiàn)其在昆蟲病原真菌中的功能提供了可能與證據(jù),并有助于用分子生物學(xué)與基因工程的手段實(shí)現(xiàn)對(duì)綠僵菌菌株的改造。

4、
　　本文的實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果為:
　?、費(fèi)aENA1不影響綠僵菌的正常生長(zhǎng)、萌發(fā)率、產(chǎn)孢量、毒力;以及細(xì)胞壁完整性、抗氧化還原能力、對(duì)K+的耐受性、對(duì)非離子滲透壓的耐受性無(wú)影響;
　?、贛aENA1專一的影響綠僵菌對(duì)Na+的耐受性,并且在轉(zhuǎn)錄水平上,Na+存在條件下,MaENA1表達(dá)量顯著上調(diào);
　　③MaENA1顯著影響綠僵菌孢子對(duì)高溫以及紫外輻射(UV-B)的耐受性;
　?、躆aENA1通過(guò)MAPK信號(hào)通路