干擾不同SCMV基因片段對(duì)玉米矮花葉病抗性的影響.pdf

1、玉米矮花葉病是危害玉米生產(chǎn)的一種世界性病毒病害，引起該病害的病毒種類很多。SCMV(Sugarcane Mosaic Virus)是引起我國(guó)玉米矮花葉病害主要病原物，如何有效防治該病害的發(fā)生是育種工作的一項(xiàng)重大挑戰(zhàn)。RNA沉默機(jī)制和SCMV基因組的深入研究，為開展玉米矮花葉抗病基因工程奠定了基礎(chǔ)。通過(guò)對(duì)3種RNAi表達(dá)載體的轉(zhuǎn)化，探索SCMV基因組中各片段對(duì)抗性影響，能夠有效指導(dǎo)玉米矮花葉病抗病基因工程育種，以獲得抗性良好的種質(zhì)資源。<

2、br>　　本研究在現(xiàn)有轉(zhuǎn)基因材料的基礎(chǔ)上，以玉米胚性愈傷為受體材料對(duì)3種RNAi(pCAMBIA3301-CNFP、pCAMBIA3301-CNSP、 pCAMBIA3301-ONFP)表達(dá)載體進(jìn)行了基因槍轉(zhuǎn)化，并成功將RNAi片段導(dǎo)入了自交系鄭58。以前期轉(zhuǎn)化成功和繁殖的T2、T3代轉(zhuǎn)基因玉米為材料，通過(guò)PCR檢測(cè)對(duì)陽(yáng)性株進(jìn)行了篩選;通過(guò)對(duì)3種RNAi轉(zhuǎn)基因材料高抗株率和中抗株率的方差分析，明確了不同SCMV基因片段對(duì)抗性的影響，為R

3、NAi抗病育種提供理論支持;此外，為了準(zhǔn)確評(píng)價(jià)病害等級(jí)，對(duì)葉片R、G、B特征進(jìn)行分析，建立了一種比較準(zhǔn)確的玉米矮花葉斑病害評(píng)價(jià)體系。主要結(jié)果如下:
　　1.利用4種自交系的胚性愈傷組織對(duì)3種RNAi表達(dá)載體進(jìn)行了基因槍轉(zhuǎn)化，獲得了237棵再生苗，其中119棵正常結(jié)實(shí)，經(jīng)PCR檢測(cè)，陽(yáng)性株有9（鄭58轉(zhuǎn)pCAMBIA3301-CNFP2棵，鄭58轉(zhuǎn)pCAMBIA3301-CNSP7棵）棵。對(duì)轉(zhuǎn)化成功的T2、T3代24個(gè)株系1853株

4、轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行PCR檢測(cè)，分別篩選到T2代474株、T3代615株的轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性株。PCR檢測(cè)卡方適合性檢驗(yàn)結(jié)果顯示:T2代各株系基本符合孟德爾分離比，T3代不符合孟德爾分離比;其田間抗性的卡方檢驗(yàn)得出了相似的結(jié)果。
　　2.T2、T3代材料的抗性接種鑒定結(jié)果顯示:大喇叭口期之后抗病性逐漸減弱，表明抗性評(píng)價(jià)應(yīng)在同一時(shí)期進(jìn)行。為了準(zhǔn)確評(píng)價(jià)病害程度，對(duì)開花期形態(tài)學(xué)上端第3片葉R、G、B特征的一系列分析建立了一種比較準(zhǔn)確的玉米矮花葉斑病害