春蘭種質(zhì)資源的SRAP分子評(píng)價(jià)及組織培養(yǎng).pdf

1、春蘭(Cymbidium goeringii)屬于蘭科(Orchidaceae)蘭屬(Cymbidium)多年生草本植物，具有很高的觀賞價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。春蘭若利用傳統(tǒng)的分株繁殖，周期較長(zhǎng)，成活率低，許多春蘭傳統(tǒng)名品無(wú)法大量繁殖，不利于種質(zhì)資源的保存和利用。因此利用雜交育種與組織培養(yǎng)技術(shù)結(jié)合是國(guó)蘭新品種選育的有效方法。而關(guān)于春蘭種質(zhì)資源遺傳多樣性方面，本研究從分子水平上揭示了部分春蘭品種親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近，為春蘭各品種間的分類(lèi)和雜交親本的選擇

2、提供重要理論依據(jù)。本研究從春蘭的種質(zhì)資源遺傳多樣性和組織培養(yǎng)等領(lǐng)域展開(kāi)相應(yīng)工作，以期對(duì)春蘭種質(zhì)的保護(hù)與開(kāi)發(fā)和春蘭名品的鑒定與保存提供理論基礎(chǔ)和技術(shù)指導(dǎo)。取得的主要研究結(jié)果如下:
　　1建立并優(yōu)化了春蘭SRAP-PCR反應(yīng)體系，為獲得春蘭的SRAP標(biāo)記圖譜，對(duì)春蘭SRAP-PCR反應(yīng)體系進(jìn)行了初步研究，通過(guò)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，從Mg2+、dNTPs、Taq酶、引物、模板5種因素4個(gè)水平對(duì)春蘭SRAP-PCR反應(yīng)體系進(jìn)行優(yōu)化。SRAP-PC

3、R最佳反應(yīng)體系為:25μl反應(yīng)體系中，Mg2+的濃度為2.5mmol/L，dNTP的濃度0.15mmol/L，Taq酶的量為0.5U，引物的濃度為1.2μmol/L，模板的質(zhì)量為90ng。
　　2從170對(duì)引物組合中篩選出條帶清晰穩(wěn)定、多態(tài)性好的引物15對(duì)。對(duì)47份蘭花種質(zhì)材料進(jìn)行PCR擴(kuò)增的結(jié)果表明:篩選出的不同引物組合擴(kuò)增出的DNA片段長(zhǎng)度在250-5000bp。15對(duì)引物組合在47份材料中共檢測(cè)到185個(gè)位點(diǎn)，其中多態(tài)性位點(diǎn)

4、184個(gè)，多態(tài)性比率(PPL)達(dá)99.46％，平均每對(duì)引物組合產(chǎn)生12.27個(gè)多態(tài)性位點(diǎn).其中引物組合Me6-Em4多態(tài)性比率最低為90％; Me8-Em16的Nei's基因多樣性數(shù)H(0.3993)和shannon信息指數(shù)I值(0.5794)和有效等位基因數(shù)Ne(1.7280)都是最高值。
　　3根據(jù)篩選出的15對(duì)多態(tài)性引物擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行聚類(lèi)分析，采用UPGMA的分析法得到春蘭種質(zhì)的親緣關(guān)系樹(shù)狀分析圖，結(jié)果顯示47份蘭花種質(zhì)遺傳相

5、似系數(shù)0.63-0.80。其中以來(lái)自于浙江紹興的‘天彭牡丹’和‘錦繡中華’、‘金汪字’和‘新梅’以及來(lái)自于四川成都的‘綠梅’和‘黃梅’的遺傳相似系數(shù)(0.80)最大。在遺傳相似系數(shù)0.662處，將47份材料劃分成五大類(lèi)群，第Ⅰ類(lèi)群又在遺傳相似系數(shù)0.670處，劃分為兩大亞類(lèi)群;第Ⅱ類(lèi)群都屬于春蘭老八種，分別是瓣型為水仙瓣的3號(hào)‘汪字’和梅瓣的7號(hào)‘萬(wàn)字’;第Ⅲ類(lèi)群為瓣型為荷瓣的5號(hào)‘環(huán)球荷鼎’;第Ⅳ類(lèi)群為瓣型為多瓣的18號(hào)‘四喜蝶’;第

6、Ⅴ類(lèi)群又在遺傳相似系數(shù)為0.691處，劃分為兩大亞類(lèi)群，其中45號(hào)春劍品種‘隆昌素’和47號(hào)蕙蘭品種為一類(lèi)，40號(hào)多花蘭品種和46號(hào)多花蘭與蕙蘭雜交品種為一類(lèi)。
　　4不同培養(yǎng)基對(duì)春蘭雜交蘭‘金荷鼎’ב赤蕙’的根狀莖生長(zhǎng)情況有明顯影響。春蘭雜交蘭‘金荷鼎’ב赤蕙’根狀莖培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基為1/2MS培養(yǎng)基;春蘭‘金荷鼎’ב赤蕙’根狀莖培養(yǎng)的最佳增殖培養(yǎng)基:1/2MS+NAA1mg/L+BA0.5mg/L+7g/L瓊脂+20g/

7、L蔗糖+3g/LAC;春蘭‘金荷鼎’ב赤蕙’根狀莖的最佳分化培養(yǎng)基:1/2MS+IBA0.2mg/L+ BA2mg/L+7 g/L瓊脂+30 g/L蔗糖。
　　春蘭雜交蘭‘金荷鼎’ב赤蕙’最佳生根培養(yǎng)基:1/2MS+BA0.1mg/L+NAA2mg/L+7g/L瓊脂+20g/L蔗糖+2g/LAC，此時(shí)組培苗長(zhǎng)出的不定根數(shù)量和根長(zhǎng)效果均最佳。
　　5選擇出了相對(duì)最適合春蘭雜交蘭組培苗的基質(zhì)為仙土∶麥飯石∶松針∶草炭=15％