日糧多不飽和脂肪酸對(duì)中華條頸龜脂質(zhì)代謝的影響及其與卵黃發(fā)生的關(guān)系.pdf

1、龜類的人工繁殖被國際龜類保護(hù)組織（IUCN/SSC，TFTSG和TCF）列為目前挽救龜類慘遭滅絕的最急迫也是最有效的方法之一，但龜類中大多數(shù)種類的人工繁殖問題仍未得到解決。通過營養(yǎng)學(xué)途徑改善龜類親體的繁殖性能，提高性腺發(fā)育質(zhì)量和產(chǎn)卵量為解決龜類的人工繁殖問題提供了可能的途徑。目前生殖營養(yǎng)學(xué)的理論研究在魚類和蝦類中開展的較多，但在龜類中相關(guān)研究幾乎處于空白。PUFAs是卵黃蛋白原(VTG)和胚胎細(xì)胞生物膜的重要成分之一，顯著影響動(dòng)物的生殖

2、性能（性腺發(fā)育、產(chǎn)卵力、卵的質(zhì)量等），是其生命過程中不可缺少的營養(yǎng)因子之一。但迄今為止，國內(nèi)外關(guān)于PUFAs對(duì)龜類卵巢發(fā)育的影響及機(jī)理研究鮮有報(bào)道。通過研究龜類的脂質(zhì)代謝與卵黃發(fā)生的關(guān)系，以便在不同的卵黃發(fā)生期為中華條頸龜提供合適的脂質(zhì)營養(yǎng)，為解決人工養(yǎng)殖條件下龜類的性腺發(fā)育和繁殖的問題奠定前期基礎(chǔ)，現(xiàn)選取雌性成體中華條頸龜（四齡，體重1557±307g）馴養(yǎng)于海南師范大學(xué)養(yǎng)殖室。兩周后，開始正式試驗(yàn)，按日糧中豆油和魚油的添加比例不同隨

3、機(jī)分成4組，分別命名為3S∶0F組（豆油∶魚油，3∶0）、2S∶1F組（豆油∶魚油，2∶1）、1S∶2F組（豆油∶魚油，1∶2）和0S∶3F組（豆油∶魚油，0∶3）。每周喂食兩次，為期一年；每?jī)蓚€(gè)月從每組中隨機(jī)選取6只，低溫冷凍麻醉后解剖，取血液測(cè)量卵黃蛋白原（VTG）含量、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、甘油三酯（TG）和總膽固醇（TC）；取肝臟測(cè)量脂肪酸組成、肝型脂肪酸結(jié)合蛋白（L-FABP）基因

4、表達(dá)量、肝脂酶（HL）活力、脂蛋白脂酶（LPL）活力、脂肪酸合成酶（FAS）活力和激素敏感性脂肪酶（HSL）活力；取肌肉測(cè)量脂肪酸組成；取十二指腸測(cè)量胰脂肪酶（PL）活性和十二指腸組織結(jié)構(gòu)。研究結(jié)果如下：
　　1.通過測(cè)定不同卵黃發(fā)生期血清VTG含量，研究日糧PUFAs對(duì)中華條頸龜卵黃募集的影響。
　　VTG含量在不同卵黃發(fā)生期與處理間的交互效應(yīng)顯著（F=1.969，df=25，P=0.019<0.05）。卵黃發(fā)生前期，日糧

5、PUFAs對(duì)VTG含量影響不顯著（P>0.05）。卵黃發(fā)生中后期，PUFAs尤其是n-3PUFAs提升血清VTG含量效果顯著（P<0.05），中期的0S∶3F組的VTG含量均在3S∶0F組的2倍以上；而后期0S∶3F組的VTG含量都在混合油組的1.5倍以上，甚至達(dá)到了3S∶0F組的3倍左右（P<0.05）。在產(chǎn)卵期，VTG含量總體明顯下降，0S∶3F組均在3S∶0F組的3倍以上（P<0.05）。綜上所述，卵黃發(fā)生中后期以外源性卵黃合成為

6、主，受日糧PUFAs影響較大，日糧中不飽和脂肪酸含量越高，血清中VTG含量亦高。
　　2.為了揭示PUFAs影響卵黃募集的途徑和機(jī)理，本研究進(jìn)一步探討了日糧PUFAs對(duì)不同卵黃發(fā)生期中華條頸龜脂質(zhì)代謝的影響：
　?。?）對(duì)脂質(zhì)吸收過程的影響
　　卵黃發(fā)生前期，胰脂肪酶（PL）活力較低，此時(shí)外源脂質(zhì)吸收較少；中期，PL活力明顯上升，峰值出現(xiàn)在11月份，幾乎是卵黃發(fā)生前期3倍以上，外源脂質(zhì)的吸收在中期達(dá)到高峰；而后期PL的

7、活力整體降至最低，且各處理組之間的PL活力差異不顯著（P>0.05），這與限制脂質(zhì)過量攝入有關(guān)；產(chǎn)卵期，PL活力又逐漸升高，這是對(duì)脂質(zhì)消耗的補(bǔ)充作用。不同卵黃發(fā)生期，3S∶0F組和1S∶2F組PL活力均高于其余組，且3S∶0F組PL活力在卵黃發(fā)生前期、中期和產(chǎn)卵期均為0S∶3F組2.2倍以上，其中前期甚至達(dá)到了0S∶3F組4.4倍（P<0.01），說明n-3 PUFAs對(duì)PL具有顯著的抑制作用。
　　通過觀察腸道組織結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)，3S

8、∶0F組腸絨毛長(zhǎng)度變短，僅為其余處理組的7/9左右（P<0.05），1S∶2F組絨毛長(zhǎng)/隱窩深（V/C）幾乎是3S∶0F組1.4倍（P<0.05），說明PUFAs可以通過提高十二指腸絨毛長(zhǎng)度和V/C值，來提高十二指腸上皮細(xì)胞的成熟度，從而增強(qiáng)脂質(zhì)的吸收能力。
　?。?）對(duì)脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)過程的影響
　　脂質(zhì)被吸收進(jìn)入到血液之后，被相應(yīng)的脂肪分解酶分解，在轉(zhuǎn)運(yùn)載體蛋白的作用下，被轉(zhuǎn)運(yùn)至不同的組織，從而影響血脂水平。
　　在卵黃發(fā)

9、生前期，肝臟中的HL和LPL的活力到達(dá)峰值，HL和LPL的活力與日糧中n-6 PUFAs含量的變化呈正相關(guān)，最大活力均出現(xiàn)在2S∶1F組。HL活力在2S∶1F組幾乎是0S∶3F組的3倍（P<0.05），而LPL最大活力組幾乎是0S∶3F組的4倍（P<0.01），說明n-3 PUFAs具有抑制HL和LPL活力的作用。此時(shí)HSL的活力降至最低，0S∶3F組的HSL活力顯著高于其余組，幾乎達(dá)到3S∶0F組的1.4倍（P<0.05），說明PUF

10、As具有提升HSL活力的作用。綜合上述分解酶活力的變化，說明前期主要以內(nèi)源性的脂質(zhì)動(dòng)員為主。血清中HDL-C水平在前期降至最低，而LDL-C則升至峰值，大量的脂質(zhì)在前期從肝臟等部位被轉(zhuǎn)運(yùn)到卵巢，最終造成血清血脂水平的下降（特別是TG，下降到最低）。但PUFAs對(duì)HDL-C，LDL-C和TG的影響均不顯著，0S∶3F組的TC含量顯著低于3S∶0F組和1S∶2F組（P<0.05）。n-3 PUFAs會(huì)促使TC通過糞固醇等途徑排出體外，同時(shí)減

11、少TC合成以應(yīng)對(duì)機(jī)體對(duì)TG需求的減少。
　　在卵黃發(fā)生中后期，HL和LPL的活力均保持在前期的2/3左右，其中中期的9月份HL和LPL的活力不到前期的1/2，HSL的活力達(dá)到峰值，這標(biāo)志著外源脂質(zhì)分解增強(qiáng)，內(nèi)源脂質(zhì)分解減弱。HL和LPL在中期的9月份和后期受日糧影響顯著，而HSL在整個(gè)中后期均顯著受到日糧的影響，說明中后期外源性的脂質(zhì)攝入是機(jī)體的主要脂質(zhì)營養(yǎng)來源。HDL-C含量逐漸升高，并在后期達(dá)到峰值，但受日糧的影響不顯著（P>

12、0.05）。LDL-C的含量在中期的9月份降至最低，不到前期的1/6。中期的9月份，日糧PUFAs顯著提高了L-FABP的表達(dá)量，其中0S∶3F組均在其余組的2倍以上（P<0.05）。日糧的PUFAs通過直接抑制LDL-C對(duì)脂質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)，顯著提高L-FABP的表達(dá)量，間接提高HDL-C的含量，使肝臟積累更多的脂質(zhì)以進(jìn)行外源性的卵黃合成。LDL-C的含量在卵黃發(fā)生中期的11月份和后期恢復(fù)并保持在一個(gè)較高的水平，脂質(zhì)被轉(zhuǎn)運(yùn)到肝外組織而減少肝臟

13、脂質(zhì)過量積累。血脂水平在中期顯著上升，并在11月份達(dá)到峰值，尤其是TG，幾乎是前期的5.5倍以上，大量外源性脂質(zhì)的攝入是造成這一結(jié)果的主要原因。后期外源性卵黃合成活動(dòng)減弱，脂質(zhì)攝入減少，血脂水平略有降低。
　　產(chǎn)卵期，日糧PUFAs對(duì)肝臟HL和LPL的活力以及L-FABP的影響均不顯著。HSL的活力逐漸降低，且受日糧的影響顯著。HDL-C和LDL-C的含量則逐漸降低，血脂水平也在產(chǎn)卵后期降至最低。這與產(chǎn)卵期的卵黃發(fā)生基本停止，機(jī)體

14、對(duì)能量需求大大降低有關(guān)。
　?。?）對(duì)脂質(zhì)轉(zhuǎn)化利用過程的影響
　　卵黃發(fā)生前期，肝臟FAS活力最低，魚油添加組顯著高于3S∶0F組；卵黃發(fā)生中后期，F(xiàn)AS活力逐漸升高，峰值出現(xiàn)在中期的9月份，達(dá)到前期的1.5倍以上，說明此時(shí)肝臟的脂質(zhì)合成代謝活躍，中期的11月份，0S∶3F組顯著高于1S∶2F組（P<0.05）；0S∶3F組FAS活力在卵黃發(fā)生后期，顯著高于其余組（P<0.05）。說明卵黃發(fā)生的中后期，肝臟從頭合成的能力受日

15、糧PUFAs的影響顯著。
　　日糧PUFAs對(duì)肌肉脂肪酸成分的影響較肝臟要顯著，在肝臟中受日糧PUFAs影響的只有C12∶0、C18∶2n6t、C22∶1n9、EPA和n-3/n-6 PUFAs，而在肌肉中除了C18∶2n6c，C18∶3n3，C23∶0和n-3/n-6 PUFAs外，均受到日糧的顯著影響（P<0.05）。肌肉中EPA，DPA，DHA，n-3 PUFAs，MUFAs和SFAs的最高含量均出現(xiàn)在0S∶3F組，是其余組