28766.海洋微生物高通量分離培養(yǎng)技術(shù)的建立及青島近海微生物多樣性研究

1、中國海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文海洋微生物高通量分離培養(yǎng)技術(shù)的建立及青島近海微生物多樣性研究姓名：張秀明申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：海洋生物學(xué)指導(dǎo)教師：張曉華20090601海洋微生物高通量分離培養(yǎng)技術(shù)的建立及青島近海微生物多樣性的研究中的基因序列進(jìn)行相似性比較。2008年7月31日從中國黃海冷水團(tuán)區(qū)域采集海水樣品，利用已建立的高通量分離培養(yǎng)技術(shù)，共分離純化600株好氧異養(yǎng)型菌株，并對其中的32株具有不同形態(tài)特征的菌株進(jìn)行了16SrDNA測序鑒定。

2、這些菌株屬于四大類群：口一變形菌綱(口一proteobacteria)(4)、7一變形菌綱(y—proteobacteria)(12)、p一變形菌綱(p—proteobacteria)(1)、放線菌門(Fimicutes)(1)。占主導(dǎo)地位的是變形菌門的菌株，尤其是y一變形菌綱。在本次研究中，我們研制了一套適合于包埋海洋微生物單個細(xì)胞的微囊制備裝置，建立了一套海洋微生物的微囊分離和高通量培養(yǎng)技術(shù)，并且成功的培養(yǎng)出海洋微生物，并對其種類進(jìn)

3、行了鑒定。這是在國內(nèi)首次建立的海洋微生物高通量培養(yǎng)方法。2008年5月到7月間，在中國舉辦第29屆奧運(yùn)會帆船比賽的青島近海岸發(fā)生的大規(guī)模的滸苔暴發(fā)引起了人們對環(huán)境變壞的巨大焦慮。為了估計這次滸苔暴發(fā)對海洋微生物多樣性的影響，我們研究了滸苔暴發(fā)期間從青島近海岸環(huán)境中獲取的海水樣品中的微生物多樣性，并且跟以前的數(shù)據(jù)進(jìn)行了比較。在滸苔暴發(fā)的中期(從2008年6月末到七月初)采集的三個不同的海水樣品中可培養(yǎng)細(xì)菌的數(shù)量是47～65104個／ml。

4、使用四種培養(yǎng)基純化保種180株好氧異養(yǎng)型菌株。63株典型菌株的16SrEINA序列分析表明，這些菌株屬于四大類群：變形菌門(45)，放線菌門(10)，厚壁菌門(6)，擬桿菌門(2)占主導(dǎo)地位的是變形菌門的菌株，尤其是y變形菌綱。大部分菌株都是己知的菌種，6株菌可能是新種，它們屬于變形菌門的4個屬：舭z甜幻，虹AP甜咖，zfP穢，砌，nP“咖口加加聊D玎弧么Z胞，D聊D玎伽。放線菌門的1個屬：刪砌f∞cc淞。在這次研究中，培養(yǎng)出口一變形菌

5、綱的六個屬，而其中的五個屬Lo(f佩ezzd，Jnnnnsch泌，Nnu矧％Phneobacter和Pse謝orMegeria都屬于玫瑰桿菌群。在滸苔暴發(fā)之前的青島近海岸海洋微生物多樣性的研究中，沒有發(fā)現(xiàn)玫瑰桿菌群的屬種，說明玫瑰桿菌群確實(shí)與藻類的暴發(fā)存在相關(guān)性。其他主要的屬與之前沒有發(fā)生滸苔時相比也有很大的不同。據(jù)我們所知，這是第一次在大型藻類暴發(fā)時研究海洋微生物的多樣性。關(guān)鍵詞：海洋微生物；高通量分離培養(yǎng)技術(shù)；多樣性；16srDNA