小麥白粉菌交配型和白化性狀的分子標記及其與小麥互作基因初步研究.pdf

1、對影響RAPD擴增圖譜的5個因子:Primer濃度、模板濃度、dNTPs濃度、Taq酶用量和Mg<'2+>濃度設(shè)計了5個水平,再通過正交分析表組建了25個反應(yīng)體系,然后根據(jù)可辨識的電泳條帶進行正交實驗表中各組結(jié)果的統(tǒng)計,建立起小麥白粉病菌的RAPD分析優(yōu)化體系.結(jié)果表明:在試驗范圍內(nèi),5個因子中對擴增結(jié)果的影響由大到小依次為Primer濃度、模板濃度、dNTPs濃度、Taq酶用量和Mg<'2+>濃度.在反應(yīng)體系中,各項因子最適濃度為:引

2、物濃度2.0μmol/L,模板濃度5ng,dNTPs濃度0.1 mmol/L、Taq酶用量1.5U,Mg<'2+>濃度2.0mmol/L.在所得的RAPD優(yōu)化體系的基礎(chǔ)上,采用集群分析法(BSA),分別對小麥白粉菌交配型和白化性狀進行了多態(tài)性分析.結(jié)果表明,在520條隨機引物中有478條單引物能擴增出條帶,占擴增引物總數(shù)的92﹪,擴增片段在300-2000bp之間.對交配型性狀,有24個引物或引物組合在DNA池中擴出多態(tài)性條帶;對白化性

3、狀,有15個引物擴出多態(tài)性條帶,但只有兩個RAPD標記,OPQ03<,775>和OPQ09<,685>可能分別與交配型和白化性狀相關(guān).將這兩個RAPD標記片段克隆,序列分析顯示:這兩段序列與目前已知的任何序列都沒有同源性,且只有OPQ03<,775>有較長的開放式閱讀框架.根據(jù)克隆片段末端序列設(shè)計引物,成功的將RAPD標記轉(zhuǎn)化為更為穩(wěn)定的SCAR標記.標記OPQ03<,775>能在7個已知交配型菌株中擴增出特異性條帶,在由34個野生菌組

4、成的菌群中的出現(xiàn)與否符合1:1的比例,跟交配型分布的理論值一致;標記OPQ09<,685>在白化和正常菌株的43個雜交后代中與白化性狀的交換率是25.6﹪,經(jīng)軟件MAP AKER3.0計算,遺傳距離為15.2cM,表明該標記與白化性狀有一定的連鎖性.從大麥白粉菌已克隆的174個基因中調(diào)出20個與大麥互作的基因,并從中選取了4個基因:BIG2,大麥誘導表達基因,在侵染初期起調(diào)控作用;Cat1,過氧化氫酶基因;CLg,與大麥白粉菌的毒力,侵