22885.鹽析萃取蛋白質分配行為研究

1、專業(yè)學位碩士學位論文鹽析萃取蛋白質分配行為研究DistributionofProteininSaltingOutExtractionSystem作者姓名：王菱工程領域：生物王猩學號：指導教師：完成日期：大連理工大學DalianUniversityofTechnology大連理工大學專業(yè)學位碩士學位論文摘要鹽析萃取是利用物質在有機溶劑與鹽構成的互不相溶的兩相中的溶解度不同而實現分離的方法，己用于多種蛋白質分離，如脂肪酶，重組人血清白蛋白，

2、免疫球蛋白G，淀粉酶，纖維素酶等，其對蛋白質結構、活性具有良好的保護作用，且收率及除雜效果較好。除此之外，鹽析萃取特有的分相快，易操作，高效率，低毒性，易回收，低成本，易與其他分離技術偶聯的優(yōu)點，使其具有良好的工業(yè)大規(guī)模生產應用前景。目前，鹽析萃取蛋白質的研究處于對特定蛋白的具體分離條件探索中，其規(guī)律性研究尚未開展。本文通過考察多種蛋白在不同鹽析萃取條件中的分配情況，對鹽析萃取分離蛋白進行了規(guī)律性歸納總結，并在此基礎上，開展了鹽析萃取偶

3、聯柱層析分離人血漿蛋白的研究。首先，研究了鹽與有機溶劑種類，pH，NaCl等因素對鹽析萃取自然體系成相的影響。乙醇鹽析萃取體系中，五種鹽成相范圍比較：檸檬酸鉀硫酸銨碳酸鉀磷酸氫二鉀碳酸鈉：磷酸氫二鉀鹽析萃取體系中，六種醇成相范圍比較：甲醇乙醇異丙醇正丙醇叔丁醇仲丁醇；pH降低，鹽析體系成相范圍縮小；NaCl的添加顯著縮減了乙醇／檸檬酸鉀和乙醇／磷酸氫二鉀鹽析萃取體系相圖的鹽濃度范圍。其次，研究了鹽與有機溶劑種類，系線長度，pH，NaCl

4、等因素對白蛋白在鹽析萃取體系中分配行為的影響，研究了11種蛋白本身疏水性與分子量對其分配行為的影響及分相時間影響因素。隨鹽離子強度增加，體系的鹽析作用增強，白蛋白由下相向上相分配，隨有機溶劑極性減小而由上相向下相分配；各類鹽析萃取體系中，系線越短，靠近臨界點體系，對蛋白萃取效果較好；添加3％NaCl的乙醇／磷酸氫二鉀體系顯著提高白蛋白收率；蛋白質疏水性對其分配行為影響較大，疏水性越大，蛋白易于向下相分配，親水性蛋白受有機溶劑極性影響明顯

5、。鹽析萃取下相為連續(xù)相時，分相時間較短，且分相時間隨蛋白含量增加而增長，有機溶劑極性減小而減小。最后，采用pH7，175％乙醇／20％磷酸氫二鉀鹽析萃取體系偶聯柱層析分離血漿蛋白。鹽析萃取過程中HSA與IgG的收率分別為977％，954％：疏水層析時，能夠一步得到純度為9856％(HPLC檢測)的人血清白蛋白；對于IgG與白蛋白的疏水層析的混合峰，采用HipTrapQFF離子交換層析可制備純IgG和白蛋白，電泳分析顯示單帶，其中，HSA