豬傳染性胸膜肺炎新型基因工程炎毒素菌苗的研究.pdf

1、豬傳染性胸膜肺炎(porcine contagious pleuropneumonia,PCP)是由胸膜肺炎放線桿菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的豬的一種高度接觸傳染性呼吸道疾病,給世界各地的養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失.該病急性以肺部廣泛出血為特征,慢性以肺部局灶性壞死和胸膜炎由為特征.由Pattison等于1957年首次報(bào)道,目前遍及世界各地.免疫接種是預(yù)防和控制該病的主要措施,目前中

2、國用于預(yù)防PCP的主要疫苗是滅活疫苗.這種滅活疫苗對(duì)于同種血清型的感染可降低死亡率,但不能降低發(fā)病率和慢性感染,不能阻止肺部病變,更不能對(duì)異型菌提供交叉保護(hù),臨床上迫切需要更加安全、有效的疫苗來預(yù)防和控制該病的發(fā)生與流行.通過對(duì)胸膜肺炎放線桿菌毒力因子的研究,證實(shí)分泌毒素為其最重要的毒力因子,同時(shí)也是其最重要的免疫原性因子,加有類毒素的滅活疫苗保護(hù)力大為提高.鑒于此,該研究最重要的免疫原性因子,加有類毒素的滅活疫苗保護(hù)力大為提高.鑒于此

3、,該研究開展了APP類毒素菌苗的研究,旨在提高滅活疫苗的保護(hù)效力.主要研究內(nèi)容包括:1.APP7型菌生長曲線的測(cè)定.通過對(duì)比國內(nèi)外培養(yǎng)胸膜肺炎放線桿菌常用的三種培養(yǎng)基,發(fā)現(xiàn)胰蛋白酶大豆湯(TSB)最有利于APP的培養(yǎng).2.ApxⅠ結(jié)構(gòu)基因在大腸桿菌中的高效表達(dá).根據(jù)ApxⅠ的結(jié)構(gòu)特點(diǎn),我們構(gòu)建了原核表達(dá)ApxⅠ的質(zhì)粒pET-ⅠCA和pET-ⅠA,在IPTG誘導(dǎo)下兩種質(zhì)粒均獲得高效表達(dá),表達(dá)的融合蛋白分子量均為110kDa,主要以包涵體形

4、式存在.3.ApxⅠ表達(dá)產(chǎn)物免疫原性的研究.將大腸桿菌中表達(dá)的包涵體進(jìn)行純化與復(fù)性,和等量弗氏不完全佐劑乳化后免疫小鼠,同時(shí)免疫的還有天然毒素作和不經(jīng)過純化與復(fù)性的粗提包涵體.4.基因工程類毒素菌苗對(duì)小鼠的保護(hù)效力研究.利用ApxⅠ、ApxⅡ和ApxⅢ的表達(dá)產(chǎn)物和中國最為流行的7型菌,和等量弗氏不完全佐劑乳化后制在類毒素菌苗免疫小鼠.5.類毒素菌苗對(duì)仔豬的效力研究.利用ApxⅠ、ApxⅡ和ApxⅢ的表達(dá)產(chǎn)物和中國最為流行的7型菌,混合后