四川姜瘟病菌的RAPD分析.pdf

1、Y783884分類號$4356四川農(nóng)業(yè)大學學號$200210014砜士學位論文四川姜瘟病菌的RAPD分析戢俊臣2005年5月摘要姜在我國栽種歷史悠久，是一種重要的調(diào)味品，也是一種重要的農(nóng)產(chǎn)品，具有很大的經(jīng)濟價值，在農(nóng)民增收和人民生活中具有極其重要的作用和地位。近年來，姜瘟病的發(fā)生同益嚴重，極大地影響了生姜的產(chǎn)量和品質(zhì)。在四川雅安、樂山、眉山、溫江、簡陽、宜賓等六地調(diào)查姜瘟病的發(fā)生情況，發(fā)現(xiàn)姜瘟引起的生姜產(chǎn)量損失一般在10—30％厶二右，

2、嚴重的會導致絕產(chǎn)絕收。發(fā)病后，整個植株丌始變黃，逐漸萎焉，最后倒伏。從發(fā)病生姜上分離得到了致病菌，經(jīng)鑒定為茄勞爾氏菌(RalstoniasoJanacearum)。對其進行了細菌學性狀的研究表明：NA，PDA，TTC培養(yǎng)基均比較適合該菌的生長；不同的溫度、pH值對其生長有明顯的影響，最適生長溫度為32“C，超過40℃不能生長：最適pH為75。青枯菌為G一菌，大小051154“m。在生理塵化性狀方面，鑒定了姜瘟病菌利用乳糖、纖維二糖和明膠

3、等碳水化合物以及大分子化合物的情況試驗測定了姜瘟病菌在番茄、辣椒、茄子以及生姜上的致病性，結(jié)果表明：不同的菌株存在明顯的生理分化，且致病性有所不同，從生姜上分離的青枯菌對生姜致病，對其他茄科植物的致病力較弱。還鑒定了四川姜瘟病的生物型，發(fā)現(xiàn)其存在I型、III型、Ⅳ型和V型等四個生物型。其中以III型和I型為主要的生物型，分別占總樣的581％和273％，生物型I在姜上首次報道。在對姜瘟病菌進行DNA水平上的遺傳多樣性分析時，我們使用了改進

4、的氯化芐法提取供試菌株的DNA，樣品共32個。經(jīng)過不同組分濃度的篩選，最終建立了適用于青枯菌RAPD的最佳反應(yīng)體系：反應(yīng)體系25pl，10buffer259l，隨機引物O39mol／l，模板DNA50ng，dNTP濃度509mol／l，M92濃度25pmol／l，taqDNA聚合酶2OU。反應(yīng)程序：94“C預變性3min；94“Clmin，36℃lmin，72℃2min，40個循環(huán)：72“C延伸lOmir14“C保存。并127個RAPD

5、通用引物中篩選出11條引物，對32個菌株的DNA進行了PCR擴增，應(yīng)用凝膠圖譜分析軟件分析了32個菌株的DNA指紋特征，并用ntsys軟件進行了聚類分析。RAPD結(jié)果表明，共擴增出619條條帶，其中580條為多態(tài)性帶，占937％，擴增片段多在0335kb之間。其中，引物OPD07、0PD20、OPl06、0P114、OPKl9、OPQl8的擴增多態(tài)性較高，達到95％以上。通過聚類，將32個菌株聚為4大類，I類主要來自溫江、宜賓以及部分2