組織化學(xué)染色方法在生長(zhǎng)板組織學(xué)研究中的應(yīng)用.pdf

1、目的：生長(zhǎng)板是位于長(zhǎng)骨遠(yuǎn)端骺與干骺端之間的一層高度器官化的透明軟骨。在組織學(xué)上根據(jù)軟骨細(xì)胞的不同的分化階段，可以將生長(zhǎng)板分為不同的水平區(qū)帶，即：靜止軟骨細(xì)胞帶、增殖軟骨細(xì)胞帶和肥大軟骨細(xì)胞帶。本研究通過(guò)對(duì)正常大鼠脛骨標(biāo)本進(jìn)行石蠟包埋、切片后分別應(yīng)用常規(guī)HE染色法、Masson三色法、AB-PAS染色法、甲苯胺藍(lán)染色法、藏花紅染色法、AZAN染色法、VG染色法、Mallory三色法、番紅染色法、固綠染色法、番紅．固綠染色法進(jìn)行染色，比較上

2、述多種組織學(xué)染色方法在正常大鼠脛骨生長(zhǎng)板組織切片中的染色規(guī)律，探討不同組織化學(xué)染色方法在生長(zhǎng)板組織形態(tài)學(xué)研究中的應(yīng)用。 方法：對(duì)正常生長(zhǎng)發(fā)育期大鼠脛骨標(biāo)本固定、脫鈣后進(jìn)行石蠟包埋和切片。切片脫蠟至水后分別進(jìn)行了(1)常規(guī)染色：入蘇木精染液5分鐘；自來(lái)水洗1分鐘；入1％鹽酸酒精分色數(shù)秒；自來(lái)水洗1分鐘；入1％的伊紅3分鐘；自來(lái)水洗1分鐘；梯度酒精脫水；二甲苯透明；中性樹膠封片。(2)Masson三色法(苯胺藍(lán)復(fù)染)染色：入A液5分

3、鐘；0.2％醋酸稍洗；入5％磷鎢酸5-10分鐘；0.2％醋酸洗2次；入B液5分鐘；0.2％醋酸洗2次；梯度酒精脫水；二甲苯透明；中性樹膠封片。Masson三色法(亮綠復(fù)染)染色：入A液5分鐘；0.2％醋酸稍洗；入5％磷鎢酸5-10分鐘；0.2％醋酸洗2次；入B液5分鐘；0.2％醋酸洗2次；梯度酒精脫水；二甲苯透明：中性樹膠封片。(3)AB(阿爾辛藍(lán))-PAS(過(guò)碘酸-Schiff)染色：蒸餾水浸洗1分鐘；入3％醋酸液中3分鐘；入阿爾新蘭

4、液中30分鐘；入3％醋酸液3分鐘；蒸餾水沖洗多次；入過(guò)碘酸氧化10分鐘；自來(lái)水沖洗；蒸餾水浸洗2次；在Schi蹴劑中染色10-20分鐘(據(jù)室溫)；流水沖洗2-5分鐘，蒸餾水洗片刻；用Harris蘇木精液淡染核；0.5％鹽酸乙醇分化數(shù)秒鐘；蒸餾水洗多次；95％及無(wú)水乙醇脫水；二甲苯透明；中性樹膠封固。(4)甲苯胺藍(lán)染色：入甲苯胺藍(lán)溶液30分鐘；水洗1分鐘；入冰醋酸溶液中于顯微鏡下分色數(shù)秒；蒸餾水洗2次，各2分鐘；自然風(fēng)干；二甲苯透明；中性

5、樹膠封片。(5)藏花紅染色：入0.1％的藏花紅溶液染色2-3分鐘；鏡下分化數(shù)秒；梯度酒精脫水；二甲苯透明；中性樹膠封片。(6)"AZAN"三色法染色：入偶氮卡紅液4-8小時(shí)，37度染色；切片冷卻后入蒸餾水漂洗；于1％苯胺的95％酒精液分色至淡紅色：0.5％磷鎢酸水溶液媒染3-5分鐘；入苯胺藍(lán)．橘黃G染液0.5-1小時(shí)；濾紙沾干后在95％酒精分色1/2.1分鐘梯度酒精脫水；二甲苯透明；中性樹膠封片。（7)Van Gieson染色法染色：入

6、Weigert氏鐵蘇木素溶液5-10min；自來(lái)水充分洗；入Van Gieson氏液染30s-1min；95％酒精分化數(shù)秒；梯度酒精脫水；二甲苯透明；中性樹膠封片。(8)Mallory一步三色法染色：重鉻酸鉀液10分鐘；流水沖洗2分鐘；蒸餾水兩次；酸性復(fù)紅液2分鐘：蒸餾水稍洗；苯胺藍(lán)液20分鐘；95％乙醇快速分化；直接無(wú)水乙醇脫水；二甲苯透明；中性樹膠封固。(9)番紅染色：在1％番紅染液中浸染3分鐘；鏡下95％酒精分化數(shù)秒；風(fēng)干；二甲苯

7、透明；中性樹膠封片。(10)固綠染色：于1％固綠染液中浸染3分鐘；鏡下95％酒精迅速分化；風(fēng)干；二甲苯透明；中性樹膠封片。(11)番紅-固綠染色：于1％番紅染液中浸染3分鐘；入1％固綠復(fù)染3分鐘；95％酒精分化數(shù)秒；復(fù)加番紅染色2分鐘；鏡下95％酒精分化數(shù)秒；風(fēng)干；二甲苯透明；中性樹膠封片。在OLIMPUS顯微鏡下觀察經(jīng)上述染色后的切片上的生長(zhǎng)板組織，并進(jìn)行圖像采集，比較上述組織學(xué)染色方法在正常大鼠脛骨生長(zhǎng)板組織切片中的染色規(guī)律。

8、 結(jié)果：(1)常規(guī)皿染色：軟骨組織呈藍(lán)染，可見不同區(qū)帶的軟骨細(xì)胞，軟骨陷窩不著色，成熟的骨小梁被染成粉紅色。(2)Masson三色染色(苯胺藍(lán)復(fù)染)：軟骨組織呈淡藍(lán)色，可見不著色的骨陷窩以及不同區(qū)帶的軟骨細(xì)胞。骨小梁外形不規(guī)則或呈鹿角狀，隨著骨小梁趨于成熟，部分骨小梁中間的顏色呈紅色，成熟的骨小梁呈深藍(lán)色。骨樣基質(zhì)到成熟骨的染色規(guī)律為淡藍(lán)色到深藍(lán)色。纖維組織呈藍(lán)色條紋狀或邊緣光滑團(tuán)塊狀，中間無(wú)骨母細(xì)胞和骨陷窩。Masson三色染色(亮

9、綠復(fù)染)：軟骨組織呈淡綠色，骨陷窩不著色，可見不同區(qū)帶的軟骨細(xì)胞。可見外形呈鹿角狀的骨小梁，隨著骨小梁趨于成熟，部分骨小梁中間的顏色呈紅色，成熟的骨小梁呈深綠色。骨樣基質(zhì)到成熟骨的染色規(guī)律為淡綠色到深綠色。(3)AB-PAS染色：軟骨組織呈深淺不一的藍(lán)色，可見軟骨細(xì)胞呈柱狀排列，從軟骨細(xì)胞靜止帶到肥大帶藍(lán)色漸淺，骨化中心的骨組織呈紅染。生長(zhǎng)板與周圍組織界限清楚。(4)甲苯胺藍(lán)染色：軟骨組織基質(zhì)呈均勻的淡紫藍(lán)色，隱約可見呈柱狀排列的軟骨細(xì)

10、胞，細(xì)胞核被染成紫色。(5)藏花紅染色：軟骨組織呈深淺不一的橘色，從軟骨細(xì)胞靜止帶到肥大帶染色漸淺，骨小梁被染成粉紅色。軟骨組織與骨組織染色后差異明顯。(6)"AZAN"三色法：軟骨組織呈淡藍(lán)色，可見柱狀排列的軟骨細(xì)胞，生長(zhǎng)板各區(qū)帶染色均較淺，骨小梁呈藍(lán)色，骨小梁之間可見橘紅色的紅細(xì)胞。(7)Van Gieson染色法：軟骨組織呈淡紅色，軟骨細(xì)胞核呈灰黑色。骨小梁形狀不規(guī)則，呈紅染，其間可見棕黃色的紅細(xì)胞。軟骨組織與骨組織界限分明。(8

11、)Mallory三色法：軟骨組織及骨小梁為藍(lán)染，深淺不一，骨小梁染色最深。軟骨細(xì)胞核呈紅色，骨小梁間紅細(xì)胞呈橘黃色。(9)番紅染色：軟骨組織及骨小梁呈深淺不一的粉紅色，從軟骨細(xì)胞靜止帶到肥大帶染色漸淺，骨小梁染色最淺。(10)固綠染色：骨小梁呈淡染的綠色，軟骨細(xì)胞及其基質(zhì)不著色。(11)番紅．固綠染色：軟骨組織呈深淺不一的粉紅色，從軟骨細(xì)胞靜止帶到肥大帶染色漸淺。骨小梁呈綠色，其間紅細(xì)胞被染成綠色。軟骨組織與骨組織對(duì)比鮮明。 結(jié)