丹參誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：本文用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)，研究丹參對骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow-derived mesenchymal stem cells，MSCs)的誘導(dǎo)作用及其機(jī)制，從而為丹參的臨床應(yīng)用提供更多的理論依據(jù)，并為臨床神經(jīng)損傷的修復(fù)提供新的治療途徑。 方法：利用梯度密度離心法從SD大鼠骨髓中分離單核細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，通過換液傳代去除非MSCs，得到純化的MSCs。用含丹參的無血清的L-DMEM培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)，以不含血清的

2、L-DMEM培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)作為對照。倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化，然后對誘導(dǎo)后的細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)的檢測：(1)免疫組織化學(xué)檢測細(xì)胞中巢蛋白(nestin)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)的表達(dá)；(2)提取誘導(dǎo)前后的MSCs的總RNA，用RT-PCR半定量方法檢測丹參誘導(dǎo)MSCs前后mash-1、ngn-1 mRNA的表達(dá)情況。 結(jié)果：丹參誘導(dǎo)90min后，細(xì)胞的發(fā)生了明顯的形態(tài)學(xué)變化，大多數(shù)

3、細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)轭愃齐p極或多極神經(jīng)元樣形態(tài)，伸出類似軸突或樹突樣突起。免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示誘導(dǎo)后的MSCs表現(xiàn)為nestin、NSE、GFAP染色陽性，對照組為陰性。RT-PCR結(jié)果顯示：誘導(dǎo)后細(xì)胞mash-1、ngn-1mRNA表達(dá)增加，對照組細(xì)胞未檢測到mash-1、ngn-1mRNA的表達(dá)。 結(jié)論：1、丹參可在體外誘導(dǎo)MSCs為神經(jīng)元樣細(xì)胞。 2、MSCs誘導(dǎo)后mash-1、ngn-1表達(dá),提示mash-1、ngn-1參