去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松與大腦皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)神經(jīng)細胞關系的探討及藥物的預防作用.pdf

1、目的：
　　 建立去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松模型,探討去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松與大腦皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)神經(jīng)細胞的關系,采用藥物進行干預,然后探討藥物的預防作用及其作用機制。
　　 方法：
　　 6月齡SPF級雌性未交配SD大鼠46只,體重(220±50)g,隨機分為5組,除基礎組6只外,其余組均為10只?；A組(Basal):不給藥,實驗開始即處死取材;假手術組(Sham)行假手術,給予溶劑對照;其他組均行雙側(cè)卵巢切除術,去卵巢組

2、(OVX組)給予溶劑對照;已烯雌酚組(DES)給予已烯雌酚30μg·kg-1·d-1;復方已烯雌酚組(CDES)給予復方已烯雌酚(已烯雌酚30μg·kg-1·d-1+康力龍2.15mg·kg-1·d-1+腦復康0.85g·kg-1·d-1)。大鼠按5ml·kg-1灌胃給藥,每天一次,連續(xù)90d。所有動物實驗結(jié)束前第14d、13d各行頸部皮下注射鈣黃綠素(10mg/kg),作為第1次熒光標記,在實驗結(jié)束前第4d、3d各行頸部皮下注射鈣黃綠

3、素(10mg/kg)作為第2次熒光標記,以在骨表面形成綠色雙熒光標志,兩次熒光標記間隔時間為10d。實驗結(jié)束時,心臟取血處死大鼠,取左側(cè)脛骨,測定脛骨上段和中段的骨組織形態(tài)計量學;取左股骨作骨密度測定及生物力學三點彎曲試驗;取左尺骨測定骨鈣、骨磷及羥脯氨酸含量;取大腦及子宮,石蠟包埋,連續(xù)切片,HE染色進行形態(tài)學分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.大鼠去卵巢后的變化:
　　 (1)去卵巢導致骨質(zhì)疏松:
　　

4、①脛骨上段松質(zhì)骨的骨丟失最明顯,表現(xiàn)為骨小梁面積百分數(shù)(％Tb.Ar)、骨小梁數(shù)目(Tb.N)分別降低了41.2%、43.7%%(P＜0.01),骨小梁分離度(Tb.Sp)增加了106.7%(P＜0.01),熒光周長百分數(shù)(%L.Pm)增加了79.8%(P＜0.05),骨礦化沉積率(MAR)增加了31.6%(P＜0.05)、骨形成率(BFR/BS、BFR/BV)分別增加了134.7%、129.5%(P＜0.01)。
　　 ②脛骨

5、中段皮質(zhì)骨靜態(tài)參數(shù)無明顯變化,但骨外膜骨外膜熒光百分數(shù)(%P-L.Pm)、骨形成率(P-BFR/BS)和骨內(nèi)膜礦化沉積率(E-MAR)分別增加了98.3%、236.6%和197.8%(P＜O.05&P＜0.01)。
　　 ③全股骨骨密度和生物力學參數(shù)彈性載荷、彎曲能量均明顯下降。
　　 ④尺骨濕重/體重比和干重/體重比均明顯下降,尺骨骨鈣和骨磷的含量均明顯降低(P＜0.05)。
　　 (2)去卵巢導致大腦皮質(zhì)區(qū)和

6、海馬區(qū)神經(jīng)細胞退變,表現(xiàn)為:大腦皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)神經(jīng)細胞廣泛變性,凋亡細胞數(shù)目均明顯增多(P＜0.05),核體積變小,核固縮,染色深,尼氏小體不清,核仁未能看清。
　　 (3)去卵巢使體重明顯增加(P＜0.05)。
　　 (4)去卵巢使子宮重量及子宮內(nèi)膜厚度明顯降低(P＜0.01)。
　　 2.已烯雌酚(DES)對去卵巢大鼠的影響:
　　 (1)能有效預防去卵巢大鼠所致的骨質(zhì)疏松。
　　 ①脛骨上段

7、松質(zhì)骨的%Tb.Ar、Tb.N分別增加了67.3%、75.1%(P＜0.01),Tb.Sp則減少46.2%(P＜0.01);%L.Pm、MAR、BFR/BS、BFR/BV分別減少了42.8%、21.5%、56%、58.4%(P＜0.05&P＜0.01)。
　　 ②脛骨中段皮質(zhì)骨骨外膜%P-L.Pm降低了40.8%(P＜0.01),骨內(nèi)膜%E-L.Pm、E-MAR和E-BFR/BS分別降低了88.6%、15.1%、94.7%(P＜

8、0.05&P＜0.01)。
　　 ③全股骨骨密度和生物力學參數(shù)彈性載荷均增加。
　　 ④尺骨濕重/體重比和干重/體重比均明顯增加(P＜0.05),但尺骨其它參數(shù)均無明顯變化(P＞0.05)。
　　 (2)不能對抗去卵巢所致大腦皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)神經(jīng)細胞退變,表現(xiàn)為:大腦皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)細胞凋亡細胞較去卵巢組減少了27.6%,但無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),而海馬區(qū)神經(jīng)細胞凋亡細胞也無明顯變化(P＞0.05)。
　　

9、 (3)使去卵巢大鼠體重降低(P＜0.01)。
　　 (4)使子宮重量及子宮內(nèi)膜厚度明顯增加(P＜0.01)。
　　 3.復方已烯雌酚(CDES)對去卵巢大鼠的影響:
　　 (1)能有效預防去卵巢大鼠所致的骨質(zhì)疏松,作用比己烯雌酚更強。
　　 ①與去卵巢組比較,CDES組脛骨上段松質(zhì)骨的%Tb.At、Tb.N分別增加了105.9%、86.7%(P＜0.01),而Tb.Sp、%L.Pm、BFR/BV分別減少

10、了58.4%、31.8%、58.4%(P＜0.05&P＜0.01)。與DES組比較,CDES組脛骨上段松質(zhì)骨%Tb.Ar、Tb.N分別增加了23.1%、16.3%(P＜0.05),Tb.Sp降低了22.7%(P＜0.05),BFR/TV增加了66.7%(P＜0.05)。
　　 ②與去卵巢組比較,CDES組脛骨中段皮質(zhì)骨面積(Ct.Ar)增加8.2%(P＜0.05)。與DES組比較,CDES組Ct.Ar增加了8.4%(P＜0.05

11、),骨外膜%P-L.Pm增加了87%(P＜0.05)。
　　 ③與去卵巢組比較,CDES組全股骨全股骨和遠端1cm骨密度分別增加了11.5%、29.5%(P＜0.01),生物力學參數(shù)最大載荷、斷裂載荷和彈性載荷均增加(P＜0.05&P＜0.01)。與DES組比較,CDES組最大載荷明顯增加(P＜0.05)。
　　 ④與去卵巢組比較,CDES組尺骨濕重/體重比和干重/體重比均明顯增加,但尺骨其它參數(shù)均無明顯變化(P＞0.0

12、5)。與DES組比較,CDES組尺骨各項參數(shù)均無明顯變化(P＞0.05)。
　　 (2)可對抗去卵巢所致大腦皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)細胞退變,表現(xiàn)為:與去卵巢組比較,CDES組大腦皮質(zhì)錐體外區(qū)神經(jīng)細胞凋亡細胞減少了41.9%(P＜0.05),但海馬區(qū)神經(jīng)細胞凋亡細胞無明顯變化(P＞0.05)。與DES組比較,CDES組大腦皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)凋亡神經(jīng)細胞凋亡數(shù)目雖然分別減少19.8%、11.3%,但均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 (

13、3)與去卵巢組和DES組比較,CDES組體重無明顯變化(P＞0.05)。
　　 (4)與去卵巢組,CDES組子宮重量及子宮內(nèi)膜厚度均明顯增加(P＜0.05&P＜0.01)。與DES組比較,CDES組子宮重量減輕(P＜0.01),但子宮內(nèi)膜厚度無明顯變化(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 雌性大鼠去卵巢后,會導致高轉(zhuǎn)換型骨質(zhì)疏松,大腦皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)神經(jīng)細胞發(fā)生退變,兩者相互關聯(lián),中樞神經(jīng)系統(tǒng)退變可能進一步加重骨