降低氧化應(yīng)激參與莫索尼定中樞抗高血壓機(jī)制的研究.pdf

1、背景：原發(fā)性高血壓（Essential Hypertension）是人類常見、多發(fā)性疾病，盡管目前已有多種策略應(yīng)用于抗高血壓治療，并取得較好的臨床療效。但其并發(fā)的心力衰竭和腦卒中等心血管疾病的發(fā)生率依然居高不下，嚴(yán)重威脅人類健康，一直是心血管領(lǐng)域研究的重要內(nèi)容。而大量研究表明交感神經(jīng)活動(dòng)的亢進(jìn)與這些疾病的發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)，因此除了降低血壓外，有效抑制交感神經(jīng)活動(dòng)也是防治高血壓病的重要策略。
　　具咪唑啉環(huán)結(jié)構(gòu)的咪唑啉樣藥物（im

2、idazoline-like drugs）通過激活中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)突觸前或后膜的a2腎上腺素受體（a2AR）和/或咪唑啉1型受體（I1R）來抑制交感神經(jīng)中樞輸出和降低血壓，故又稱為中樞抗高血壓藥物，主要有可樂定和莫索尼定等。而中樞抗高血壓藥物的主要作用靶區(qū)域位于腦干的頭端延髓腹外側(cè)區(qū)（即RVLM），RVLM是心血管調(diào)控的關(guān)鍵中樞，其所含的前交感神經(jīng)元與脊髓交感節(jié)前神經(jīng)元發(fā)生單突觸聯(lián)系，從而調(diào)控外周的心血管交感神經(jīng)活動(dòng)。新近的研究證實(shí)RVL

3、M神經(jīng)元的興奮性的增高是病理情況下交感神經(jīng)活動(dòng)增強(qiáng)的主要機(jī)制。因此，抑制前交感神經(jīng)元活動(dòng)能有效降低交感輸出，降低血壓，也是中樞降壓的主要機(jī)制，但目前中樞降壓的具體機(jī)制并不清楚。
　　盡管咪唑啉樣藥物的抗高血壓機(jī)制目前仍然存在一些爭論，如作用受體、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、以及與其它中樞神經(jīng)遞質(zhì)和調(diào)質(zhì)的的相互關(guān)系。但引起我們關(guān)注的是大量的研究表明腎素-血管緊張素系統(tǒng)（RAS）的異常與高血壓的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后關(guān)系密切。而中樞RAS不依賴外周，主要通過

4、影響交感興奮性和壓力反射功能等，參與高血壓心血管活動(dòng)的調(diào)節(jié)，其中RVLM內(nèi)血管緊張素II（AngiotensinII，AngII）通過AT1R激活NADPH氧化酶誘導(dǎo)氧化應(yīng)激水平的提高是高血壓交感亢進(jìn)的重要機(jī)制，因此，本研究主要觀察高血壓狀態(tài)下咪唑啉樣藥物（莫索尼定）是否通過降低RVLM內(nèi)AngII/AT1R/NADPH氧化酶通路介導(dǎo)的氧化應(yīng)激的途徑實(shí)現(xiàn)其中樞抗高血壓效應(yīng)。
　　方法：本研究以自發(fā)性高血壓大鼠（Spontaneou

5、sly hypertensive rat，SHR）為模型，采取第四腦室置管灌流技術(shù)，分別中樞（icv）給予Moxo及其受體阻斷劑（I1R、a2AR）兩周，通過監(jiān)測動(dòng)物的血壓、心率和腎交感活動(dòng)，并檢測RVLM內(nèi)的氧化應(yīng)激變化（通過DHE染色技術(shù)檢測RVLM內(nèi)超氧陰離子含量）、Western Blot及RT-qPCR檢測RVLM內(nèi) AT1R、NADPH氧化酶、SOD等表達(dá)量的變化，從而觀察Moxo的中樞心血管效應(yīng)與氧化應(yīng)激之間的關(guān)系。

6、>　　結(jié)果：
　　1.SHR-RVLM內(nèi)，Moxo的抗高血壓作用是通過中樞I1R所介導(dǎo)。
　　1.1、中樞給予Moxo對(duì)SHR血壓和心率影響。
　　SHR灌流 Moxo及相應(yīng)阻斷劑兩周后監(jiān)測血壓和心率水平，Moxo組 MAP（143±3mmHg，HR：348±9bpm，n=5）要明顯（p<0.05）低于aCSF組（MAP:186±5mmHg，HR:392±5bpm，n=6），Moxo+Yoh（a2AR阻斷劑）組（MAP

7、:145±4 mmHg，HR:363±5bpm，n=5）與Mox組血壓和心率沒有顯著變化（p>0.05），而Moxo+Efa（I1R和a2AR混合阻斷劑）組（MAP:175±3mmHg，HR:388±4bpm，n=5）明顯（p<0.05）高于Mox組的血壓和心率水平
　　1.2、中樞給予Moxo對(duì)SHR尿液中去甲腎上腺素(NE)含量的影響
　　SHR灌流Moxo及相應(yīng)阻斷劑兩周，收集24小時(shí)尿液測定NE含量，Moxo組（0.

8、287±0.055μg/24h，n=5）和Moxo+Yoh組（0.260±0.049μg/24h，n=4）均顯著低于aCSF組（0.553±0.047μg/24h，n=5）的 NE含量,且又均低于 Moxo+Efa組（0.489±0.033μg/24h，n=5），p<0.05。
　　2.中樞灌流Moxo減弱SHR-RVLM內(nèi)的氧化應(yīng)激水平
　　SHR灌流Moxo（兩周，aCSF為對(duì)照）能明顯（p<0.05）降低RVLM內(nèi)微量

9、注射SOD模擬物Tempol導(dǎo)致的MAP（-10±3 vs-35±2△mmHg）；HR（-16±3 vs-40±4△bpm）；RSNA（-6±3 vs-22±3△％）的下降程度（n=5，p<0.05）。
　　3.Moxo能通過I1R介導(dǎo)來減少RVLM內(nèi)超氧陰離子。
　　3.1、 SHR和WKY大鼠中樞灌流Moxo兩周，DHE染色結(jié)果顯示，SHR-RVLM內(nèi)超氧陰離子的含量（33.60±0.91，n=4）與WKY組RVLM內(nèi)超

10、氧陰離子的含量（18.40±0.76，n=5）相比明顯增多（p<0.05）。
　　3.2、 SHR中樞灌流Moxo及其阻斷劑兩周，DHE染色結(jié)果顯示，Moxo組RVLM內(nèi)超氧陰離子含量（21.62±2.67，n=7）和Moxo+Yoh組超氧陰離子含量（22.39±1.31，n=6）均明顯（p<0.05）低于aCSF組超氧陰離子含量（34.80±1.32，n=5），且又均顯著（p<0.05）低于Moxo+Efa組RVLM內(nèi)超氧陰離子

11、含量（32.28±0.94，n=4）。
　　4. Moxo能下調(diào) SHR-RVLM內(nèi)AT1R、NADPH氧化酶（Nox4）蛋白表達(dá)，并不能上調(diào)SOD蛋白表達(dá)。
　　Western Blot顯示，Moxo組和Moxo+Yoh組RVLM內(nèi)AT1R、Nox4蛋白表達(dá)均較aCSF組明顯降低（p<0.05），且又均明顯低于Moxo+Efa組（p<0.05）。而各組之間SOD蛋白表達(dá)量無差異（p>0.05）。
　　5.中樞灌流Mo

12、xo能明顯降低AngⅡ升壓效應(yīng)。
　　SHR灌流 Moxo（兩周，aCSF為對(duì)照）能明顯（p<0.05）降低 RVLM內(nèi)微量注射AngⅡ(10 pmol)導(dǎo)致的MAP（7.16±0.44 vs17.5±1.89△mmHg）、HR（1.5±1.58 vs8.77±2.64△bpm）、RSNA（11±1.9 vs20.54±3△%）的升高程度（n=5，p<0.05）。
　　6. Moxo能降低SHR-RVLM內(nèi)PI3K、p-Ak

13、t蛋白表達(dá)以及核轉(zhuǎn)錄因子NFκB活性。
　　Western Blot顯示，Moxo組RVLM內(nèi)PI3K、p-Akt及NFκB亞基p65蛋白表達(dá)較aCSF組明顯減少（n=5，p<0.05）；RT-qPCR顯示，Moxo組RVLM內(nèi)p65基因表達(dá)也較aCSF組明顯降低（n=5，p<0.05），而NFκB的內(nèi)源性抑制因子IκB基因表達(dá)明顯增多（n=5，p<0.05）。
　　7. SHR慢病毒干擾PI3K后，Moxo中樞降壓效應(yīng)被明

14、顯減弱。
　　PI3K siRNA干擾慢病毒（LenVi-PI3K）或空載慢病毒（LenVi-GFP）局部感染RVLM，三周后中樞灌流Moxo（兩周）監(jiān)測MAP、HR。結(jié)果顯示，RVLM局部感染LenVi-GFP后，與溶劑對(duì)照組比較，Moxo能明顯能降低血壓（n=6，p<0.05）；但局部感染LenVi-PI3K后，與溶劑對(duì)照組比較，Moxo降壓效應(yīng)明顯被減弱（n=6，p>0.05）。
　　8.PI3K途徑參與介導(dǎo)Moxo下

15、調(diào)AT1R、Nox4蛋白表達(dá)水平。
　　Western Blot顯示，LenVi-PI3K+aCSF組、LenVi-PI3K+Moxo組及LenVi-GFP+Moxo組的RVLM內(nèi)AT1R、Nox4蛋白表達(dá)無差異（p>0.05）。
　　9.PI3K途徑參與介導(dǎo)Moxo下調(diào)p-p65、上調(diào)p-IκB的蛋白表達(dá)水平。
　　Western Blot顯示，LenVi-PI3K+aCSF組、LenVi-PI3K+Moxo組及Le