蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1在哮喘小鼠肺組織的表達(dá)及其與氣道炎癥的關(guān)系.pdf

1、目的:
　　 探討蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1在哮喘小鼠肺組織的表達(dá)及其與哮喘氣道炎癥的關(guān)系。
　　 方法:
　　 將30只清潔級BALB/c小鼠隨機(jī)分為對照組(Normal，N)、哮喘組(Asthma，A)原礬酸鈉干預(yù)組(Sov，S)，每組10只。A組于0-14d之間隔同一次OVA（卵清蛋白）腹腔注射致敏，第15-45d隔天一次霧化吸入10％OVA激發(fā)，共15次，復(fù)制哮喘動物模型。N組采用等量生理鹽水腹腔注射，生

2、理鹽水霧化吸入。S組早期同A組一樣采用OVA腹腔注射及OVA霧化吸入，在動物處死前術(shù)周采用原礬酸鈉溶液腹腔注射。末次激發(fā)后24h內(nèi)處死動物，支氣管肺泡灌洗液(BALF)作細(xì)胞計數(shù)測白細(xì)胞總數(shù)及分類，ELISA檢測血清中OVA特異性抗體IgE、肺泡灌洗液(BALF)上清中檢測IL-4含量，常規(guī)蘇木素-伊紅(HE)染色觀察大體組織病變和肺內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤；應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)測量小鼠支氣管壁和支氣管平滑肌厚度。免疫組化測小鼠肺組織IL-4R表達(dá)，

3、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測小鼠肺組織SHP-1mRNA表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 N組小鼠只是偶有打噴嚏及搔鼻現(xiàn)象，余未見異常。A組小鼠在激發(fā)過程中出現(xiàn)口唇發(fā)紺、呼吸急促、腹部翕動、煩躁不安、納差，弓背、毛發(fā)凌亂及二便失禁等哮喘發(fā)作表現(xiàn)。S組小鼠癥狀更重，甚至出現(xiàn)聳毛，肢體抽搐和嘆息樣呼吸，部分小鼠皮膚上出現(xiàn)散在的綠豆大硬結(jié)，以頸部明顯，伴關(guān)節(jié)腫脹。光鏡下肺組織病理切片：N組小鼠氣管粘膜上皮細(xì)胞完整，氣管及各

4、級支氣管僅見散在的杯狀細(xì)胞，未見腺體增生及明顯炎性細(xì)胞浸潤；A組小鼠氣道壁及氣道平滑肌層明顯增厚，黏膜下水腫，黏膜皺褶增多、延長，管腔狹窄，有時可見黏液栓堵塞，氣道上皮細(xì)胞脫落，黏膜下及管周有大量炎性細(xì)胞浸潤。S組比A組更明顯，粘膜水腫更明顯，粘膜皺襞更多甚至出現(xiàn)了嵴的斷裂。支氣管壁的厚度A組(18.067±0.316μm2/μm)、S組(18.769±0.350μm2／μm)與N組(6.619±0.183μm2/μm)相比差異有統(tǒng)計學(xué)

5、意義(p＜0.05)：平滑肌的厚度A組(7.567±0.224μm2／μm)、S組(8.014±0.0.027μm2／μm)與N組(2.559±0.090μm2/μm)相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)。BALF中白細(xì)胞總數(shù)A組(7.35±0.589)×105／ml、S組(7.55±0.925)×105/ml與N組(1.35±0.369)×105/ml比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)，A與S比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05)。B

6、ALF上清液IL-4的含量A組(29.446±0.350pg/ml)、S組(36.703±0.428pg/ml)與N組(8.953±0.108pg/ml)比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)，A與S比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)。血清總IgE的含量A組(0.678±0.027pg/ml)、S組(0.857±0.014pg/ml)與N組(0.286±0.007pg/ml)比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)，A與S比較差異有統(tǒng)計學(xué)意

7、義(p＜0.05)。免疫組化測肺組織IL-4R陽性區(qū)平均積分光密度A組(149.221±11.154)、S組(150.337±10.832)與N組(92.676±16.414)比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)，A與S比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05)。RT-PCR測肺組織SHP-1mRNA含量積分光密度A組(0.0763±0.018)、S組(0.064±0.011)與N組(2.728±0.101)比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05

8、)，A與S差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05)。各組肺組織中IL-4R的表達(dá)與炎癥細(xì)胞的增生均呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別是A組（r=0.944）、S組(r=0.857)、N組（r=0.861）。各組肺組織中IL-4R的表達(dá)與SHP-1mRNA的表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別是A組（r=-0.963），S組（r=-0.909），N組（r=-0.956）。各組肺組織中IL-4R的表達(dá)與SHP-1mRNA的表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別是A組（r=-0.