雪松松針內(nèi)生真菌的分離及抑菌活性研究.pdf

1、植物內(nèi)生真菌能夠產(chǎn)生新型化合物，是開發(fā)高效、無殘留農(nóng)藥的重要資源。本文從健康雪松的松針組織中分離篩選得到兩株具有抑菌活性的內(nèi)生真菌菌株，編號(hào)分別為N03和N06，對(duì)常見的幾種植物病原真菌具有抑制作用，對(duì)其發(fā)酵液及菌絲體的活性做出了初步的研究，對(duì)N03菌株的發(fā)酵條件進(jìn)行了初步優(yōu)化。主要研究結(jié)果如下：
　　 1.采用組織分離法，從雪松的松針組織中分離得到11株內(nèi)生真菌。通過平板對(duì)峙法，測(cè)定11株內(nèi)生真菌分別對(duì)辣椒疫霉病菌(Phyto

2、phthoracapsici)、番茄枯萎病菌(Fusariumoxysporum.Fsp.Lycopersici)、蘋果炭疽病菌(Peziculamalicorticis)、梨黑星病菌(Venturiapirina)、蘋果腐爛病菌(Cytosporamandshurica)和小麥赤霉病菌(Fusariumgraminearum)這六種常見植物病原真菌的拮抗作用。結(jié)果表明，11株雪松植物內(nèi)生真菌對(duì)6種供試植物病原真菌都具有拮抗作用，其中N

3、03和N06菌株作用效果明顯，對(duì)辣椒疫霉病菌，番茄枯萎病菌和蘋果炭疽病菌表現(xiàn)較強(qiáng)抑菌活性。通過抑菌圈法將11株內(nèi)生真菌分別對(duì)金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureu)、大腸桿菌(Escherichiacoti)、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)和稻白葉枯病菌(Xanthomonascampestris)4株常見病原細(xì)菌進(jìn)行抑菌試驗(yàn)。結(jié)果表明，內(nèi)生真菌對(duì)病原細(xì)菌的抑菌活性有差異，其中同N10菌株對(duì)金黃色葡萄球

4、菌的抑菌活性為100μg/ml鏈霉素抑菌直徑的54.11％，而N05菌株對(duì)枯草芽孢桿菌的抑菌活性達(dá)到100μg/ml鏈霉素的70.86％。
　　 2.通過對(duì)雪松內(nèi)生真菌的發(fā)酵液和菌絲體進(jìn)行生物測(cè)定。結(jié)果表明，內(nèi)生真菌發(fā)酵液對(duì)不同植物病原真菌抑菌活性存在差異，其中N03菌株發(fā)酵液對(duì)蘋果腐爛菌(Cytosporamandshurica)抑制率達(dá)到80.56％，N06菌株對(duì)辣椒疫霉菌(Phytophthoracapsici)抑制率達(dá)到

5、80.74％。抑制菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定菌絲體甲醇提取物對(duì)病原菌的抑菌效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)N03菌株菌絲體甲醇提取物活性較明顯。N03菌株不同時(shí)間發(fā)酵液的抑菌活性與菌絲體發(fā)酵過程中生物量試驗(yàn)表明，內(nèi)生真菌N03菌株在生長(zhǎng)過程中產(chǎn)生的抑菌活性物質(zhì)與發(fā)酵天數(shù)及生物量相關(guān)。
　　 3.N03菌株生長(zhǎng)特性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該菌株的最佳生長(zhǎng)溫度為28℃，其生長(zhǎng)最適碳源為木糖，最適氮源為蛋白胨，pH為5-9，以牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基生長(zhǎng)最好。N03菌株發(fā)酵條