西瓜未受精胚珠離體培養(yǎng)研究.pdf

1、單倍體培養(yǎng)能快速純合基因型，獲得新的種質(zhì)資源，與常規(guī)育種方法相結(jié)合可以加速育種進(jìn)程，拓寬育種途徑;所獲得的單倍體材料也可以用于基因定位和遺傳圖譜的構(gòu)建。一般通過誘導(dǎo)雌核發(fā)育和雄核發(fā)育獲得單倍體。國內(nèi)外許多研究者對西瓜單倍體的誘導(dǎo)進(jìn)行了研究，和輻射花粉授粉、花藥離體培養(yǎng)和未受精子房離體培養(yǎng)相比，西瓜未受精胚珠離體培養(yǎng)的研究相對較少且未有成功的報(bào)道，而在葫蘆科作物中，南瓜、黃瓜、甜瓜、西葫蘆的離體誘導(dǎo)雌核發(fā)育都獲得了再生植株。因此，本研究以

2、西瓜未受精胚珠為外植體，探索通過未受精胚珠離體培養(yǎng)途徑獲得單倍體植株的可能性，明確培養(yǎng)過程中的影響因素，為高效穩(wěn)定的西瓜未受精胚珠離體培養(yǎng)體系建立提供技術(shù)支持。本試驗(yàn)的主要研究結(jié)果如下:
　　1.愈傷組織誘導(dǎo)影響因素的研究:(1)基因型:基因型是影響誘導(dǎo)成功的關(guān)鍵因素，試驗(yàn)中8個(gè)不同材料（基因型）的胚珠反應(yīng)率和愈傷誘導(dǎo)率都有顯著性差異，愈傷誘導(dǎo)率最高的是中科6號(92.3％)，最低的是野生西瓜‘09005’(57.2％);(2)低

3、溫預(yù)處理:4℃低溫預(yù)處理沒有顯著提高胚珠反應(yīng)率和愈傷誘導(dǎo)率，對于胚珠反應(yīng)率和愈傷誘導(dǎo)率的影響因培養(yǎng)基不同而不同;(3)高溫預(yù)培養(yǎng):35℃高溫預(yù)培養(yǎng)可以提高胚珠反應(yīng)率和愈傷誘導(dǎo)率，預(yù)培養(yǎng)3d可以得到較高的愈傷誘導(dǎo)率和質(zhì)量較好的愈傷組織;(4)培養(yǎng)基:本試驗(yàn)采用正交設(shè)計(jì)對25種誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行了篩選，6-BA和NAA對啟動(dòng)胚珠發(fā)育和愈傷組織生長有重要影響;2，4-D誘導(dǎo)出的愈傷組織難以分化;培養(yǎng)基中添加ABA不利于胚珠反應(yīng)和產(chǎn)生愈傷組織。

4、r>　　2.再生植株誘導(dǎo)影響因素的研究:(1)基因型:本試驗(yàn)采用大果黑美人、西農(nóng)8號和野生西瓜‘09005’誘導(dǎo)再生植株時(shí)，野生西瓜‘09005’沒有得到再生植株，其它兩個(gè)材料獲得了再生植株和芽叢;(2)取材時(shí)間:本試驗(yàn)比較了開花當(dāng)天和花后1天的未受精胚珠對再生植株誘導(dǎo)的影響，花后1天的材料利于再生植株的誘導(dǎo);(3)培養(yǎng)基:較低的激素水平濃度組合6-BA1 mg/L+NAA0.5 mg/L+TDZ0.05 mg/L更利于通過胚狀體發(fā)育途

5、徑產(chǎn)生再生植株;培養(yǎng)基中添加水解酪蛋白有利于胚珠的發(fā)育，以600mg/L最為適宜。
　　3.通過誘導(dǎo)西瓜未受精胚珠獲得了大量的愈傷組織，對離體培養(yǎng)的未受精胚珠進(jìn)行石蠟切片觀察愈傷組織來源，結(jié)果表明:珠被細(xì)胞極易產(chǎn)生愈傷組織，由珠被組織產(chǎn)生的愈傷難以分化成苗。
　　4.試驗(yàn)獲得了3棵完整的再生植株，并對再生植株進(jìn)行了SSR分子鑒定，證明得到的再生植株基因型是純合的。說明通過離體培養(yǎng)未受精胚珠獲得再生植株是可行的，本試驗(yàn)研究結(jié)果