2009-2012年內蒙古地區(qū)狂犬病病毒分離與遺傳變異分析.pdf

1、狂犬病(Rabies)是由狂犬病病毒(rabies virus，RABV)引起的人獸共患病，可以感染所有哺乳動物，其死亡率接近100％。內蒙古自治區(qū)既往一直是狂犬病低發(fā)或無病例報告的地區(qū)，但從2007年至2014年，出現了30多例動物感染狂犬病的病例;2011年內蒙古自治區(qū)人狂犬病報告病例高達12例。本研究于2009-2012年間在內蒙古自治區(qū)收集了22份疑似狂犬病的動物腦組織樣本，對其進行RT-PCR檢測，共檢出16份陽性樣本。將22

2、份疑似狂犬病的動物腦組織研磨離心后，取上清液腦內接種BALB/c小鼠，成功分離出16株狂犬病病毒株。
　　RT-PCR擴增測序后獲得16株狂犬病病毒全基因組序列，對分離的16株狂犬病病毒株進行N基因、G基因和全基因遺傳進化分析，結果表明16株分離株均屬于基因Ⅰ型，分離株NM5、NM8、NM13和NM16屬于Cosmopolitan譜系，其余12株分離株屬于Asian譜系，推測這兩大譜系為內蒙古狂犬病主要流行譜系。屬于Asian譜系

3、的12株分離株與離近省份（北京、山西、河北）分離株BeijingHu1、Shananxi-BZ-6、HeBei0N基因核苷酸相似性高達98.8％～99.9％;屬于Cosmopolitan譜系的4株分離株與鄰近國家蒙古國、俄羅斯分離株Mongolia3、3502fN基因核苷酸相似性分別在99.0％-99.1％和97.8％-98.0％。
　　16株狂犬病病毒分離株的5個結構蛋白編碼區(qū)大小、重要功能基序以及重要功能位點比較保守，但部分位

4、點仍有氨基酸突變。16株分離株N-P非編碼區(qū)以及P-M非編碼區(qū)的長度不同，屬于Asian譜系的12株分離株N-P非編碼區(qū)、P-M非編碼區(qū)長度分別為91 nt和87 nt，屬于Cosmopolitan譜系的4株分離株N-P非編碼區(qū)、P-M非編碼區(qū)長度分別為90 nt和88 nt?？袢〔《痉蛛x株NM11、NM12、NM14和NM15在N蛋白第375位次要磷酸化位點處由蘇氨酸變?yōu)橘嚢彼?，失去磷酸化位點。將16株分離株與疫苗株的G蛋白主要抗原

5、位點進行比較，結果表明屬于亞洲Asian譜系12株分離株與疫苗株存在G蛋白抗原位點Ⅲ V332I差異，屬于Cosmopolitan譜系4株分離株與疫苗株存在G蛋白抗原位點Ⅱ T36A差異。
　　在疫苗保護實驗中，ERA（Cosmopolitan譜系）疫苗免疫BALB/c小鼠對分離株NM4（Asian譜系）和NM8（Cosmopolitan譜系）的攻擊均能提供有效保護，保護率為100％，初步證實了目前獸用ERA疫苗能有效地保護動物對