卡培他濱節(jié)拍性化療對(duì)結(jié)腸癌的抑制效應(yīng)及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　我國(guó)結(jié)腸癌發(fā)病率和死亡率高，總體預(yù)后不佳；亟待開發(fā)新型藥物或優(yōu)化現(xiàn)有的抗腫瘤藥物給藥策略，以延長(zhǎng)患者生存。本研究旨在評(píng)價(jià)卡培他濱節(jié)拍性化療對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制效應(yīng)，并探索抗血管生成機(jī)制在其中的作用。
　　方法：
　?、俚鞍酌庖哂≯E法（Western Blot）及免疫細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)（ICC）篩選胸苷磷酸化酶（TP）高表達(dá)、胸苷磷酸合酶（TS）低表達(dá)的結(jié)腸癌細(xì)胞株。
　?、贑CK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、Tr

2、answell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)及流式細(xì)胞術(shù)觀察高頻次、低劑量（節(jié)拍性給藥）環(huán)磷酰胺（CTX）及5-氟尿嘧啶（5-Fu）對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞體外增殖、侵襲、細(xì)胞周期及凋亡的影響；小管形成實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)上述藥物對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）體外小管形成能力的影響；酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)（ELISA）檢測(cè)上述藥物作用后，結(jié)腸癌細(xì)胞分泌血管生成相關(guān)因子的變化。
　?、蹣?gòu)建結(jié)腸癌細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤模型，節(jié)拍性給予CTX或卡培他濱治療，繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線；免疫組織化

3、學(xué)染色技術(shù)（IHC）檢測(cè)移植瘤內(nèi)Ki-67、CD34；免疫組化染色及western blot檢測(cè)腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（VEGF）及血小板反應(yīng)蛋白-1（TSP-1）表達(dá)；TUNEL染色檢測(cè)腫瘤細(xì)胞凋亡；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)荷瘤裸鼠外周血中的內(nèi)皮祖細(xì)胞（CEPs）百分比；ELISA技術(shù)檢測(cè)外周血VEGF及TSP-1水平。
　　結(jié)果：
　?、倥c對(duì)照組相比，低劑量CTX組及5-Fu組結(jié)腸癌細(xì)胞的體外增殖能力均下降（抑制率分別為54.1

4、4％±7.33%，53.83%±6.48%），細(xì)胞凋亡率則未見(jiàn)明顯變化（對(duì)照組、CTX組及5-Fu組凋亡率分別為2.37%±0.11%，2.40%±0.12%及2.58%±0.11%，P＞0.05）。Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，5-Fu組腫瘤細(xì)胞體外侵襲能力明顯下降（穿出小室細(xì)胞數(shù)為12.0±3.6比31.3±13.5，P＜0.05），CTX組無(wú)明顯改變（29.0±5.3比31.3±13.5，P=0.753）。
　　②

5、HUVEC小管形成實(shí)驗(yàn)中，低劑量CTX組及5-Fu組的小管數(shù)量、小管總長(zhǎng)度及小管間連接點(diǎn)數(shù)量均明顯低于對(duì)照組（P＜0.05）。ELISA技術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示，相比對(duì)照組，分別經(jīng)CTX及5-Fu處理后細(xì)胞上清中VEGF水平均降低（391.27±10.91pg/mL比268.20±7.75 pg/mL比248.21±3.51 pg/mL，P＜0.05），且5-Fu組中VEGF水平較CTX組更低（P=0.022）。與對(duì)照組相比，CTX組及5-Fu

6、組細(xì)胞上清中TSP-1水平顯著升高（57.97±1.29 ng/mL比57.03±1.52 ng/mL比49.77±1.34 ng/mL，P＜0.05），兩用藥組間無(wú)明顯差異（P=0.437）。
　　③體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，節(jié)拍性CTX及卡培他濱組裸鼠皮下移植瘤生長(zhǎng)速度明顯減緩（用藥4周后，對(duì)照組、CTX節(jié)拍性化療組及卡培他濱節(jié)拍性化療組移植瘤體積分別為2786.19±381.88mm3，1022.18±131.29mm

7、3及1068.07±209.15mm3，P＜0.01）。免疫組化染色結(jié)果顯示，相比對(duì)照組，CTX節(jié)拍性化療組及卡培他濱節(jié)拍性化療組瘤體內(nèi)Ki-67表達(dá)下降（45.00%±5.57%比48.33±3.51%比85.00%±3.00%，P＜0.01）；對(duì)照組瘤體內(nèi)MVD為7.7±2.5，而CTX節(jié)拍性化療組及卡培他濱節(jié)拍性化療組分別為3.0±1.0及2.7±0.6（P＜0.05），兩用藥組間 Ki-67指數(shù)及 MVD無(wú)明顯差異。免疫組化染色

8、及western blot結(jié)果均顯示，CTX節(jié)拍性化療及卡培他濱節(jié)拍性化療均抑制荷瘤裸鼠VEG F表達(dá)，上調(diào)T SP-1表達(dá)，但兩用藥組間未見(jiàn)明顯差異。T UNEL染色顯示兩用藥組瘤體內(nèi)腫瘤細(xì)胞凋亡未見(jiàn)明顯變化。
　?、芰魇郊?xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，對(duì)照組荷瘤裸鼠外周血 CEPs比例為24.58%±5.36%，而CTX節(jié)拍性化療組及卡培他濱節(jié)拍性化療組分別為7.73%±2.90%及6.22%±1.67%（P＜0.01），兩用藥組間則無(wú)明顯差

9、異（P=0.63）。ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，對(duì)照組荷瘤裸鼠外周血VEGF水平為139.26±15.75pg/ml，而CTX節(jié)拍性化療組及卡培他濱節(jié)拍性化療組分別為112.40±7.26pg/ml及73.67±11.04pg/ml（P＜0.05）；同時(shí)，兩用藥組外周血TSP-1水平升高（三組分別為17.70±0.83ng/ml，29.76±0.84ng/ml，25.79±1.48ng/ml；P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　氟