DFP的合成、排鋁作用及對慢性荷鋁動物的保護(hù)機(jī)制的研究.pdf

1、[目的]本課題利用Fe<'3+>與Al<'3+>均為三價金屬離子，且半徑相似的特點(diǎn)，把DFP作為一種新型鋁螯合劑進(jìn)行研究。通過研究擬達(dá)到以下目的：1.建立一種新的合成DFP的方法；2.完成DFP的一般毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)；3.對DFP的排鋁效果從多方面進(jìn)行研究；4.探討DFP對慢性荷鋁動物的保護(hù)作用機(jī)制。為尋求一種價格低廉、安全有效的治療鋁中毒的藥物提供理論依據(jù)。 [方法] 1.DFP的合成2-甲基-3-羥基-4-吡喃酮與甲胺水溶

2、液于95～100℃加熱回流，得到白色結(jié)晶即DFP。 2.DFP的毒理學(xué)實(shí)驗(yàn) 2.1 LD<,50>實(shí)驗(yàn) 取健康昆明種小鼠50只，雌雄各半，按體重隨機(jī)分為5個劑量組。以灌胃方式給藥1次，觀察1周(w)，記錄動物死亡數(shù)。 2.2 外周血和骨髓微核實(shí)驗(yàn) 取健康昆明種小鼠60只，雌雄各半，按體重隨機(jī)分為5組：陰性對照組、環(huán)磷酰胺陽性對照組、1/8LD<,50>組、1/4LD<,50>組、1/2LD<,50

3、>組，分別于第二次與第七次給藥后24h進(jìn)行DFP的微核實(shí)驗(yàn)。 2.3 精子畸變實(shí)驗(yàn) 健康昆明種雄性小鼠150只，按體重隨機(jī)分為5組：陰性對照組、環(huán)磷酰胺陽性對照組、1/8LD<,50>組、1/4LD<,50>組、1/2LD<,50>組，給藥5天(d)，分別在給藥后第14、28、35、42和70d進(jìn)行DFP的精子畸變實(shí)驗(yàn)。 3.DFP的排鋁作用研究 3.1小鼠的排鋁實(shí)驗(yàn) 健康昆明種小鼠84只，雌雄各

4、半，22～24g，自由飲水和進(jìn)食。隨機(jī)分為6組：陰性對照組、荷鋁對照組、預(yù)防組、低劑量組、中劑量組、高劑量組，以灌胃方式給藥。將小鼠以頸椎脫臼法處死，取其血清、肝、腎、腦和骨骼組織。用原子吸收分光光度法測定小鼠血清和各組織中的鋁、銅、鋅、鈣、鐵、鎂含量。 3.2家兔排鋁實(shí)驗(yàn) 3.2.1急性排鋁實(shí)驗(yàn) 雄性新西蘭大白兔24只，荷鋁后隨機(jī)分成荷鋁對照組、低、中、高劑量組。將DFP的滅菌水溶液給低、中、高劑量組灌胃。收集

5、尿液，待做元素鋁及其他必需元素的測定。 3.2.2與維生素C(Ve)、美司那(Mesan)協(xié)同排鋁作用 將24只新西蘭大白兔隨機(jī)分為荷鋁組、DFP組、DFP+Vc組、DFP十美司那組。荷鋁后依次灌胃給予滅菌無離子水、DFP、DFP+Vc、DFP+美司那。收集尿液，待做元素鋁的測定。 3.2.3不同給藥方式的排鋁作用比較 18只新西蘭大白兔隨機(jī)分為荷鋁對照組、灌胃組和注射組，荷鋁后分別以灌胃和皮下注射方式給

6、DFP。收集尿液，待做元素鋁的測定。 3.2.4亞慢性排鋁實(shí)驗(yàn) 新西蘭大白兔16只，隨機(jī)分為陰性對照組、荷鋁對照組、DFP組。荷鋁后DFP組用DFP溶液灌胃2周。分別于實(shí)驗(yàn)開始、染鋁結(jié)束及給DFP結(jié)束時從兔耳靜脈取血。第三次取血后，將兔處死，取肝、腎、腦、骨組織，待做血清及組織中鋁及其他必需元素的測定。 4.DFP對荷鋁動物的保護(hù)作用機(jī)制研究 4.1 對荷鋁小鼠抗氧化系統(tǒng)的恢復(fù)作用 健康昆明種小鼠

7、84只，雌雄各半，22～24g，自由飲水和進(jìn)食。隨機(jī)分為6組：陰性對照組、荷鋁對照組、預(yù)防組、低、中、高劑量組，以灌胃方式給藥。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，小鼠眼球取血及肝、腎、腦組織測定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活力和丙二醛(MDA)含量。 4.2 DFP對慢性荷鋁小鼠神經(jīng)系統(tǒng)的保護(hù)作用 健康昆明種小鼠98只，雌雄各半，22-24g，自由飲水和進(jìn)食。按體重隨機(jī)分為7組，以灌胃方式給藥，分組情況如下：陰

8、性對照組、預(yù)防組、低劑量組、中劑量組、高劑量組、荷鋁組、鹽酸吡硫醇對照組。 4.3 DFP對鋁誘發(fā)小鼠遺傳物質(zhì)損傷的抑制作用 采用昆明種小鼠進(jìn)行骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)和精子畸變實(shí)驗(yàn)。兩種實(shí)驗(yàn)均隨機(jī)分為5個劑量組：陰性對照組、陽性對照組、荷鋁對照組、低劑量組和高劑量組。 4.4 DFP對荷鋁動物肝腎功能的影響 Wistar大鼠AlCl<,3>染毒3周后分別給予不同劑量的DFP 1周，測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、

9、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)的活力及總蛋白、白蛋白、總膽紅素和結(jié)合膽紅素、肌酐、尿素氮、尿酸的含量。同時測定肝、腎組織中鋁、鋅、銅、鐵、鈣、鎂等元素的含量。 [結(jié)論] 1.DFP一般合成分三步進(jìn)行，步驟多，時間長，反應(yīng)條件要求苛刻。本研究建立的一步合成法，縮短了時間，降低了成本，提高了收率。 2.DFP毒性低、排鋁效果顯著，同時對其它必需元素鋅、鎂、鈣、銅、錳均無促排作用。 3.DFP能夠改

10、善荷鋁小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。 4.DFP能拮抗鋁誘發(fā)的中樞神經(jīng)遞質(zhì)功能減退。 5.DFP對鋁引起的凋亡相關(guān)蛋白改變有一定的調(diào)節(jié)作用。 6.DFP對鋁誘發(fā)小鼠遺傳物質(zhì)損傷具有抑制作用。 7.DFP對荷鋁動物肝、腎功能具有一定的保護(hù)作用。 總之，本研究建立了DFP新的合成方法；對DFP的毒性進(jìn)行了評價；首次系統(tǒng)全面地對DFP的排鋁效果以及對荷鋁動物的保護(hù)作用機(jī)制進(jìn)行了研究。為尋求一種價格低廉、安全有效的