大潮氣量通氣致兔VILI模型建構(gòu)及IL-1β、NF-κBp65表達(dá)研究.pdf

1、第一部分大潮氣量通氣建立兔的最佳VILI實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型
　　目的：應(yīng)用大潮氣量機(jī)械通氣制作兔的最佳VILI實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。
　　方法：根據(jù)黃金分割法原理,實(shí)驗(yàn)組分三組分別采用三種不同潮氣量68mL/kg、60mL/kg和45mL/kg各持續(xù)通氣1分鐘造成兔的急性肺損傷,取0h,12h,24h,48h四個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行觀察,統(tǒng)計(jì)存活數(shù)觀察兔存活情況,計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)肺濕/干重比反映肺水腫嚴(yán)重程度及變化,組織病理學(xué)切片觀察各時(shí)間點(diǎn)肺組織形態(tài)

2、學(xué)改變。
　　結(jié)果：1、實(shí)驗(yàn)組A(VT68mL/kg)、實(shí)驗(yàn)組B(VT60mL/kg)和實(shí)驗(yàn)組C(VT45mL/kg)兔48h存活率分別為58.33％(7/12)、91.67%(11/12)和100%(12/12)。2、與正常對(duì)照組(4.40±0.02)相比,實(shí)驗(yàn)組A(VT68mL/kg)、實(shí)驗(yàn)組B(VT60mL/kg)和實(shí)驗(yàn)組C(VT45mL/kg)的肺濕/干重比在0小時(shí)無(wú)明顯變化,比值分別為4.46±0.08、4.48±0.0

3、8和4.43±0.12;12小時(shí)明顯增高,比值分別為5.27±0.18、4.84±0.12和4.64±0.06;在24小時(shí)時(shí)達(dá)峰值,比值分別為5.50±0.18、5.29±0.12和4.88±0.07;48小時(shí)后降低,比值分別為5.00±0.31、4.77±0.21和4.46±0.10。3、組織病理學(xué)切片顯示機(jī)械通氣后不同時(shí)間肺組織均有不同程度形態(tài)學(xué)改變,實(shí)驗(yàn)組A(VT68mL/kg)肺組織形態(tài)學(xué)改變非常明顯;實(shí)驗(yàn)組B(VT60mL/k

4、g)肺組織形態(tài)學(xué)改變明顯;實(shí)驗(yàn)組 C(VT45mL/kg)肺組織形態(tài)學(xué)改變不明顯。
　　結(jié)論：大潮氣量通氣成功建立兔的最佳VILI實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型,建立的指標(biāo)為VT60mL/kg、RR50次/分、Fi0221%。
　　第二部分大潮氣量通氣致兔VILI后IL-1β、NF-κBp65表達(dá)研究
　　目的：在已建立的兔的VILI實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型上就以下問(wèn)題進(jìn)行探討:(1) VILI時(shí)炎癥因子IL-1β蛋白水平的表達(dá)規(guī)律。(2) NF-

5、κBp65活化是否參與了VILI炎癥反應(yīng)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制及其在蛋白水平的表達(dá)規(guī)律。(3)通過(guò)對(duì)NF-κBp65和IL-1β在蛋白水平的半定量及肺濕/干重比以統(tǒng)計(jì)學(xué)方法建立大潮氣量通氣致兔 VILI后推斷損傷時(shí)間的數(shù)學(xué)公式。
　　方法：按照已建立的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型,以大潮氣量(60mL/kg)機(jī)械通氣1分鐘,取0h,0.5h,1h,3h,6h,12h,18h,24h,48h九個(gè)時(shí)間點(diǎn)觀察,計(jì)算肺濕/干重比反映肺水腫程度及規(guī)律;組織芯片應(yīng)用

6、; HE染色觀察肺組織病理學(xué)改變;免疫組織化學(xué)染色(SABC法)和免疫印跡法(Western blot)分別檢測(cè)VILI后不同時(shí)間IL-1β和NF-κBp65在肺組織中的蛋白表達(dá)規(guī)律。
　　結(jié)果：1、與正常對(duì)照組相比,肺濕/干重比在大潮氣量(60mL/kg)通氣后0.5小時(shí)急劇升高,以后逐漸升高,24小時(shí)到峰值,隨后降低。2、肉眼觀察肺組織表面可見(jiàn)大量小片狀的紅色或暗紅色的出血灶,鏡下可見(jiàn)肺組織結(jié)構(gòu)不完整,肺泡壁明顯增厚,肺泡腔和

7、肺間質(zhì)內(nèi)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、紅細(xì)胞漏出及明顯肺水腫。3、免疫組織化學(xué)染色和免疫印跡法檢測(cè) IL-1β蛋白表達(dá),以β-actin作為內(nèi)參照,與正常對(duì)照組比較,在通氣后0.5小時(shí)表達(dá)增加,3小時(shí)達(dá)高峰,以后逐漸降低,48小時(shí)后接近正常對(duì)照組。4、免疫組織化學(xué)染色和免疫印跡法檢測(cè)NF-κBp65蛋白表達(dá),以β-actin作為內(nèi)參照,與正常對(duì)照組比較,在通氣后0.5小時(shí)表達(dá)增加,6小時(shí)表達(dá)高峰,以后逐漸降低,在48小時(shí)后仍高于正常對(duì)照組。5、回歸

8、方程:分別以肺濕/干重比和NF-κBp65、IL-1β蛋白水平的半定量數(shù)據(jù)五個(gè)因素為自變量,肺損傷后時(shí)間為因變量,求得各自的回歸方程。
　　結(jié)論：1.大潮氣量通氣致兔急性肺損傷后,炎癥因子IL-1β早期即表達(dá)且有時(shí)間依賴性,求得的回歸方程可能適用于肺損傷后即刻至3小時(shí)之間損傷時(shí)間的推斷。
　　2.核轉(zhuǎn)錄因子NF-κBp65參與了VILI炎癥反應(yīng)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制且表達(dá)有時(shí)間依賴性,求得的回歸方程可能適用于肺損傷后即刻至6小時(shí)之間