氫醌對(duì)體外培養(yǎng)骨髓基質(zhì)細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)的影響.pdf

1、目的：1.進(jìn)行骨髓基質(zhì)細(xì)胞的體外傳代培養(yǎng)，觀測(cè)其生物學(xué)性能；2.研究氫醌對(duì)激活劑佛波酯(PMA)導(dǎo)致的骨髓基質(zhì)細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)的影響，并初步探討基質(zhì)細(xì)胞中NF-κB表達(dá)抑制在苯的血液學(xué)毒性中所起的作用。 方法：本實(shí)驗(yàn)為體外實(shí)驗(yàn)，分兩部分完成，第一部分：骨髓基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)及其生物學(xué)特性觀測(cè)。從志愿者抽取并分離得到骨髓基質(zhì)細(xì)胞，進(jìn)行體外細(xì)胞培養(yǎng)，動(dòng)態(tài)觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化，流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)胞周期檢測(cè)，繪制細(xì)胞生長曲線；第二部

2、分：將細(xì)胞轉(zhuǎn)移入六孔培養(yǎng)板，調(diào)整每孔細(xì)胞密度為1.0×105/m1,氫醌用四種濃度水平0.1μM，1μM，10μM，100μM分別處理骨髓基質(zhì)細(xì)胞并立即加入細(xì)胞激活劑PMA，每組設(shè)立空白對(duì)照，并用NF-κB抑制劑PDTC作陽性對(duì)照，臺(tái)盼蘭染色，比較各組細(xì)胞活力的變化，用臺(tái)盼蘭拒染率表示結(jié)果。細(xì)胞免疫組化，DAB染色后鏡下觀察氫醌未暴露和暴露后P65蛋白位置和活性的改變；然后分別在處理后0h.12h.24h.72h提取核蛋白，TransA