熱休克蛋白90抑制劑降低阿爾茨海默癥β淀粉樣肽的作用機制初步研究.pdf

1、目的：研究格爾德霉素(Geldanamycin，GA)對β淀粉樣肽(β-amyloid peptjde，Aβ)生成的影響，初步探討GA降低Aβ的作用機制。方法：利用哺乳動物細胞表達載體pCMV5，構(gòu)建β淀粉樣肽前體蛋白APP695(ainyloid beta-proteill precursor,，APP)全長cDNA，以及三種缺失不同細胞內(nèi)吞信號的截短蛋白△NPXY、△YENP和△ε的重組質(zhì)粒。將上述四種重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CHO細胞，篩選并

2、經(jīng)Western blotting鑒定，建立相應(yīng)的CHO細胞穩(wěn)定表達細胞系。400nM GA處理細胞22小時后，用ELISA試劑盒檢測四種細胞株上清中分泌的Aβ量，同時Western blotting檢測細胞總的APP表達量。為了驗證Hsp90抑制劑是否是通過激活熱休克蛋白家族另一成員——Hsp70，影響細胞分泌Aβ，將表達Hsp70的質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染CHO細胞并進行檢測。另外，還采用雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)檢測了GA對Aβ生成的影響。結(jié)果：

3、與陰性對照相比，400nM GA處理22小時和過表達Hsp70，均可降低四種穩(wěn)定表達CHO細胞系(CHO/APP695、△NPXY、△YENP和△ε)上清中的Aβ量；其中CHO/APP695細胞系的Aβ量降低最明顯。Western blotting檢測細胞裂解液，顯示Hsp70表達可以使CHO/APP695細胞株總APP表達量明顯增多。結(jié)論：Hsp90抑制劑GA有可能是通過激活Hsp70的表達，降低Aβ產(chǎn)量，并且此過程可能涉及到Hsp7