血清膽堿酯酶的分離純化及其在農藥殘留快速檢測中的應用.pdf

1、當前，農產(chǎn)品的病蟲害防治仍以化學防治為主，有機磷和氨基甲酸酯類農藥仍然是目前在蔬菜、糧食等作物上使用最廣泛的農藥。隨著病蟲害抗藥性的逐年增加，農藥用量越來越大，施藥次數(shù)更加頻繁，使農藥殘留問題更加突出，食用農藥超標的蔬菜、水果等而發(fā)生食物中毒的事件時有發(fā)生。因此，建立一套簡便、快速、準確、能在農產(chǎn)品生產(chǎn)和流通各環(huán)節(jié)現(xiàn)場檢測的農藥殘留檢測方法，控制“超毒”果蔬流入市場已成為急待解決的問題。該課題在前人研究的基礎上，對農藥殘留快速檢測方法—

2、—膽堿酯酶抑制法進行了研究。 酶抑制法理論基礎是有機磷和氨基甲酸酯類農藥能抑制動物體內膽堿酯酶(Cholinesterase，ChE)的活性，在一定條件下，ChE的活性變化與有機磷農藥的濃度存在良好的相關性，從而通過測定農產(chǎn)品的農藥殘留提取液對ChE酶活力的影響即可判定農藥殘留的情況。該課題從酶源的篩選入手，獲得一種來源廣泛、廉價、對常見有機磷及氨基甲酸酯類農藥敏感的血清膽堿酯酶，并對該酶的純化方法和基本酶學性質進行了研究，在此

3、基礎上，建立了兩種快速檢測方法：比色法和試紙法。研究結果如下： 通過對6種不同動物組織的膽堿酯酶的比較研究，最終選擇以A血清BChE作為農藥殘留的檢測用酶。該酶經(jīng)過兩次硫酸銨鹽析、DEAE-52離子交換層析和SephadexG-200凝膠過濾層析后，其比活力由21.5U/mg提高到5944.1U/mg，純化278.5倍，回收率為17.8％，達到電泳純。該酶的Km=2.4×10-5，碘化硫代丁酰膽堿對該酶沒有過量底物抑制現(xiàn)象，最適

4、反應溫度為37℃，最適反應pH值為7.5～8.0；該酶熱穩(wěn)定性較好，在37℃～40℃保溫60min，酶活力基本不變，敵敵畏(DDVP)對該酶的IC50為0.001mg/kg。 在此基礎上，建立了兩種農藥殘留的快速檢測方法。①比色法：以碘化硫代丁酰膽堿(BTChI)為底物，5-5’-二硫代-二硝基苯甲酸(DTNB)為顯色劑，412nm比色測定吸光值變化，計算膽堿酯酶的抑制率，進而推算農藥殘留情況。當抑制率大于35％時，表明農藥含量