柯薩奇病毒B組3型在ECV304中持續(xù)感染模型的建立及其持續(xù)感染機(jī)制的初步研究.pdf

1、盡管CVB3是常見(jiàn)的病毒性心肌炎等急性疾病的病原體，然而也有許多證據(jù)表明CVB3也參與了許多嚴(yán)重的慢性疾病的病理過(guò)程。有研究表明CVB3與擴(kuò)張型心肌病關(guān)系密切，說(shuō)明病毒可能在心血管系統(tǒng)中持續(xù)存在，本文旨在通過(guò)建立CVB3(Nancy)在ECV304細(xì)胞中持續(xù)感染的模型，初步探索CVB3持續(xù)感染的機(jī)制。 以10<'-1> TCID50， 10<'-2> TCID50， 10<'-3>TCID50 CVB3感染ECV304，建立持續(xù)

2、感染細(xì)胞模型，穩(wěn)定傳代120天以上，上清液及細(xì)胞裂解液接種敏感細(xì)胞Vero沒(méi)有CPE，核酸檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性，從細(xì)胞裂解液中提取病毒RNA，進(jìn)行RT反應(yīng)，反轉(zhuǎn)錄出基因組cDNA，將整個(gè)基因組劃分為5段進(jìn)行PCR擴(kuò)增，連接目的片段至PGM-T載體，進(jìn)行測(cè)序，分析可能存在的變異是否與持續(xù)感染狀態(tài)的形成有關(guān)。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)持續(xù)感染細(xì)胞中CVB3與建模前的CVB3存在16處核苷酸變異，1處位于5’NTR：16R-G，其余15處位于病毒的ORF，其