海螵蛸酸性多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)測定和對小鼠胃黏膜保護作用的研究.pdf

1、多糖是一類廣泛存在于動植物、微生物中重要的生物大分子物質(zhì)。糖生物學的研究日趨得到重視,糖及糖綴合物的結(jié)構(gòu)、功能以及開發(fā)利用,已逐漸成為生物醫(yī)藥界關注的新熱點。 海洋生物是多糖的一個重要來源。本課題選用的海螵蛸主要來源于海洋生物曼氏無針烏賊的內(nèi)殼,其中含碳酸鈣80～85％,殼角質(zhì)6～7％,粘液質(zhì)10～15％,并含少量氯化鈉、磷酸鈣、鎂鹽等?！侗静菥V目》記載海螵蛸具有各種收斂作用,可治多種內(nèi)外出血,對胃潰瘍、十二指腸潰瘍及部分慢性胃

2、炎等有效,可臨床用于皮膚潰瘍、褥瘡等的治療?，F(xiàn)今,海螵蛸可用作治療骨骼損傷,消化道疾病,婦科疾病,齒衄,男性不育,肝纖維化,治療口瘡及眼部疾病,還有止血等作用。然而,海螵蛸作為食品加工的廢棄物,除了少量用于中藥材外,大部分沒有得到很好地利用,造成資源嚴重的浪費。 本次實驗從海螵蛸中提取生物多糖。多糖類物質(zhì)的傳統(tǒng)提取分離方法為“水提醇沉法”。海螵蛸和水一起煮沸三次,收集上清,用Sevag法和5％三氯乙酸除去多糖中的蛋白質(zhì),離心去沉

3、淀后,上清反復乙醇沉淀-復溶-乙醇沉淀,分離得到多糖粗品。再用DEAE-Sepharose Fast Flow陰離子交換層析分離多糖,分別得到海螵蛸中性多糖CBP-W和酸性多糖CBP-S。用Sepharose CL-6B和Sephacryl S-300凝膠柱層析等方法純化CBP-S,得到純品CBP-S1和CBP-S2。用高效液相色譜法(HPLC)測定多糖的純度及其相對分子量,相對分子量分別為360kD和87kD。CBP-S1的單糖組成為

4、:Rha:Fuc：Man:Glu:Gla:GluN:GalN=1:2.8:1:6.8:3.1:2.8:2.2;CBP-S2的單糖組成為:Rha:Fuc：Man:Glu:Gla:GluN:GalN=1:5.6:1:3.6:2.6:2.6:2.8。均無硫酸根。CBP-S1及CBP-S2的Man、Glc以及Gal上可能含有糖醛酸。存在多種糖連接方式,CBP-S1以β-1,4-Glc連接為主,而CBP-S2以β-1,4-Glc和1,3,4連接的

5、巖藻糖為主。 本課題進而研究了從海螵蛸中提取的多糖的生物學活性。實驗用海螵蛸中提取的酸性多糖(CBP-S)預處理小鼠后,用無水乙醇灌胃處理,觀察小鼠胃黏膜的損傷程度,探究其治療保護胃黏膜細胞的機制。用CBP-S分別預處理小鼠3d和5d,再用無水乙醇誘導其胃黏膜損傷,測定潰瘍指數(shù),以及胃黏膜的NO,GSH,MDA和SOD等指標。結(jié)果發(fā)現(xiàn),各劑量CBP-S預處理3d的小鼠潰瘍指數(shù)從33.71％到9.01％,預處理5d從20.72％到

6、2.06％；400mg/kgCBP-S預處理3d,各劑量預處理5d,胃黏膜的MDA含量較造模組都有顯著下降(125.41±28.79 nmol/g,145.80±26.13 nmol/g,153.88+21.19nmol/g,127.1±5.68 nmol/g,p<0.05);除了100 mg/kg預處理3d組,各劑量組均能顯著提高GSH和NO的含量(GSH：282.93±32.33 mg/g,293.57±20.76 mg/g,260

7、.79±39.23mg/g,253.71±21.11 mg/g,359.38±10.89 mg/g,p<0.05),(NO：23.40±4.41 μmol/g,25.83±4.89μmol/g,21.60±3.05 μmol/g,22.75±2.44 μmol/g,p<0.05);各組的SOD活性均有顯著上升(30.61±6.37 U/mg,45.35±1.90 U/mg,47.12±4.68 U/mg,36.48±5.64U/mg,4

8、1.38±8.23 U/mg,39.42±8.76 U/mg,p<0.05)。這些結(jié)果提示CBP-S對乙醇誘導的小鼠胃黏膜具有細胞保護作用。本次研究從海洋生物曼氏無針烏賊的骨狀內(nèi)殼中提取生物活性多糖,通過分離純化,獲得海螵蛸多糖純品CBP-S1和CBP-S2,對其理化性質(zhì)及結(jié)構(gòu)進行了研究,并初步探討了其對小鼠胃黏膜的保護作用。 本課題對海螵蛸多糖的分離純化,結(jié)構(gòu)鑒定以及生物學活性進行了較系統(tǒng)地研究,進一步建立和完善海洋生物活性多