蕨麻對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其血清差異蛋白表達(dá)的初步研究.pdf

1、目的：研究蕨麻乙醇提取物對(duì)大鼠結(jié)扎冠狀動(dòng)脈所致急性心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其對(duì)差異蛋白質(zhì)表達(dá)譜的影響。 方法：選取雄性SD大鼠隨機(jī)分為手術(shù)對(duì)照組，模型組，蕨麻乙醇提取物0.9g·kg-1，1.8g·kg-1，3.6 g·kg-1干預(yù)組。手術(shù)對(duì)照組給予3％0羧甲基纖維素(CMC)，連續(xù)灌胃14天，陽性藥物組恬爾心組(鹽酸地爾硫卓，diltiazem，30mg·kg-1)于造模前2h口服給藥，通過結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈左前降支建立急

2、性心肌缺血再灌注模型。測(cè)定各處理組動(dòng)物心功能的變化；取血清檢測(cè)LDH、CK、SOD、NOS活性及MDA、NO含量；透射電鏡檢測(cè)急性心肌缺血再灌注損傷以后心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化；采用TUNEL原位凋亡檢測(cè)方法半定量觀察蕨麻乙醇提取物對(duì)凋亡細(xì)胞陽性率的影響，免疫組化染色檢測(cè)iNOS、Caspase3、Caspase9蛋白水平；RT-PCR檢測(cè)心肌組織caspase3mRNA、caspase9 mRNA水平，探討蕨麻保護(hù)作用的可能機(jī)制。用金屬

3、離子交換芯片(IMAC3-Cu)和弱陽離子交換芯片(CM10)結(jié)合表面增強(qiáng)激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)分析大鼠急性心肌缺血再灌注損傷后不同處理組血清中蛋白質(zhì)表達(dá)譜的改變。 結(jié)果：1蕨麻乙醇提取物對(duì)大鼠急性心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用： (1)心功能的變化：與模型組相比，各濃度蕨麻乙醇提物給藥組均明顯改善心功能指標(biāo)(±dp/dt max)(P＜0.01)；高、中劑量組左室收縮壓(Lvsp)也較模型組升高(P＜0.05)；(

4、2)HE染色：模型組、蕨麻各濃度組及陽性藥物組缺血范圍為左室前側(cè)壁。其中模型組組織病理學(xué)改變顯著，心肌間質(zhì)出現(xiàn)炎細(xì)胞浸潤，心肌纖維嗜酸性變，肌節(jié)斷裂、消失，壞死明顯；蕨麻高、中劑量組心肌損傷程度較模型組明顯減輕，低劑量組效果稍差，但較模型組仍有改善。(3)心肌超微結(jié)構(gòu)的變化：電鏡結(jié)果顯示蕨麻各濃度給藥組能夠減輕心肌細(xì)胞缺血再灌注損傷導(dǎo)致的線粒體腫脹、空泡化等超微結(jié)構(gòu)的損傷改變，維持相對(duì)整齊的心肌纖維排列。(4)血清LDH、CK檢測(cè)：各濃

5、度蕨麻給藥組(與模型組相比)均可顯著降低缺血再灌注損傷后大鼠血清LDH活性(P＜0.01)、CK活性(P＜0.01)；(5)TUNEL染色：各濃度蕨麻給藥組(與模型組相比)均可顯著降低心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)(P＜0.01)。 2.蕨麻乙醇提取物對(duì)大鼠急性心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用的機(jī)制研究： (1)血清MDA、SOD、NO檢測(cè)：與模型組相比，各濃度蕨麻可顯著提高大鼠血清中SOD活力(P＜0.01)，減少M(fèi)DA的產(chǎn)生(P＜0.

6、01)，降低NO含量(P＜0.01，P＜0.05)，且呈現(xiàn)一定的濃度依賴性；(2)免疫組化染色：與模型組相比，各劑量蕨麻可顯著降低缺血再灌注損傷后大鼠心肌組織iNOS(P＜0.01)、Caspase3(P＜0.01)、Caspase9(P＜0.01)蛋白表達(dá)。(3)RT-PCR：給與高、中劑量蕨麻乙醇提取物可顯著降低缺氧損傷心肌caspase-9 mRAN水平(P＜0.05)，低劑量組與模型組相比未見明顯差異。模型組caspase-3

7、mRAN表達(dá)量較手術(shù)對(duì)照組顯著升高，高、中、低劑量蕨麻乙醇提取物組可顯著降低心肌組織caspase-3 mRAN水平(其中高、中劑量組P＜0.01，低劑量組P＜0.05)。 3.金屬離子交換芯片(IMAC3-Cu)結(jié)果顯示與模型組比，蕨麻給藥組有1個(gè)蛋白表達(dá)上調(diào)，5個(gè)蛋白表達(dá)下調(diào)。弱陽離子交換芯片(CMlO)結(jié)果顯示9個(gè)蛋白表達(dá)上調(diào)，1個(gè)蛋白表達(dá)下調(diào)。 結(jié)論：1蕨麻乙醇提取物能夠顯著改善急性心肌缺血再灌注所致的心肌組織形