染料木黃酮對去勢小鼠脾細(xì)胞凋亡及雌激素受體亞型表達(dá)的影響.pdf

1、背景：隨著植物雌激素在圍絕經(jīng)期婦女中的廣泛應(yīng)用，有關(guān)它的研究也越來越多。關(guān)于植物雌激素，尤其是染料木黃酮(GEN)的免疫調(diào)節(jié)作用已引人注目。但關(guān)于染料木黃酮對免疫細(xì)胞凋亡及免疫細(xì)胞上雌激素受體亞型影響的研究仍很少。 目的：本研究擬觀察并比較GEN和雌二醇(E2)對去勢小鼠脾細(xì)胞凋亡及相關(guān)調(diào)控基因Fas、FasL的影響，同時比較GEN和雌二醇對雌激素受體亞型表達(dá)的影響，為染料木黃酮的臨床應(yīng)用提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 材料與方法

2、: 本實(shí)驗(yàn)取10周齡BALB／C小鼠(由復(fù)旦大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物部提供)，分為3組：去勢組(行雙側(cè)卵巢切除術(shù)，OVX)、假手術(shù)組、青年對照組。去勢組于術(shù)后5天起行陰道脫落細(xì)胞涂片，連續(xù)5天均未出現(xiàn)角化細(xì)胞為手術(shù)成功。假手術(shù)小鼠即將10周齡BALB／C小鼠雙側(cè)腹下區(qū)進(jìn)腹取少量脂肪組織后關(guān)腹。OVX小鼠及假手術(shù)小鼠在術(shù)后第¨天與青年組同時無菌取脾，研磨，制備脾細(xì)胞懸液，假手術(shù)組及青年對照組脾細(xì)胞懸液放入未加藥的培養(yǎng)液中，OVX小鼠脾細(xì)胞懸液

3、放入含有不同藥物的培養(yǎng)液中。根據(jù)培養(yǎng)液中所含藥物及藥物濃度的不同將OVX小鼠分為：去勢+E2(10^-5umol／1、10^-4umol／l、lO^．3umol／、10A-2umol／四個濃度)、去勢+GEN(3．7umol／1、18．5umol／l、37．0umol／1、92．5umol／1四個濃度組)、去勢+溶劑(DMSO)組、去勢空白對照組，共計12組。然后將標(biāo)本放入培養(yǎng)箱(37~C、5~~C02)培養(yǎng)72h后，一部分細(xì)胞懸液采用

4、Annexin-FITC、PI雙重染色后流式細(xì)胞儀測定脾細(xì)胞凋亡率；另一部分細(xì)胞懸液待提取脾細(xì)胞總RNA，RT-PCR技術(shù)檢測脾細(xì)胞上Fas、FasL凋亡基因及ERa、ERBmRNA的表達(dá)。 結(jié)論: 與青年對照相比，去勢小鼠脾細(xì)胞凋亡率增加，F(xiàn)as、FasL基因表達(dá)增加，ERa、ERβ基因表達(dá)降低。脾細(xì)胞凋亡的增加可能與Fas、FasL基因表達(dá)的增多有關(guān)。 與雌二醇相似，染料木黃酮在高濃度時，增加去勢小鼠脾細(xì)胞的

5、凋亡率，同時Fas、FasL基因的轉(zhuǎn)錄水平也升高。提示染料木黃酮、雌二醇致脾細(xì)胞凋亡可能與上調(diào)凋亡促進(jìn)基因Fas、FasL基因表達(dá)有關(guān)。 低劑量的雌二醇脾細(xì)胞凋亡率及Fas、FasL基因與青年組無差異，低濃度染料木黃酮脾細(xì)胞凋亡率及Fas、FasL基因與青年組無差異，染料木黃酮和雌二醇均可能逆轉(zhuǎn)去勢小鼠脾細(xì)胞凋亡。 不同濃度雌二醇對脾細(xì)胞上ERa、ERB基因表達(dá)的影響體現(xiàn)了雌二醇對ER的雙相調(diào)節(jié)作用：在生理范圍內(nèi)為正向調(diào)