利用MALDI-TOF-TOF質(zhì)譜分析膽囊結(jié)石中非粘性蛋白的組成.pdf

1、目的：探討膽固醇結(jié)石和膽色素結(jié)石結(jié)中是否存在非粘性蛋白質(zhì)并鑒定蛋白質(zhì)的組成。
　　方法：取30例經(jīng)保膽取石術(shù)的患者的膽囊結(jié)石，其中男11例，女19例。通過肉眼觀察和甘油三酯法測定膽固醇含量結(jié)合的方法對膽囊結(jié)石進(jìn)行分類。將膽固醇含量≥70％歸為膽固醇型結(jié)石，將膽固醇含量≤30%歸為膽色素型結(jié)石，其中20例膽固醇型和10例膽色素型。應(yīng)用組織裂解法（RIPA）分別提取膽固醇結(jié)石和膽色素結(jié)石的蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)變性后十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝

2、膠（SDS-PAGE）電泳分離膽固醇結(jié)石和膽色素型結(jié)石的蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)經(jīng)考馬斯亮藍(lán)和銀染后切取蛋白質(zhì)條帶經(jīng)酶解脫鹽，然后利用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間串聯(lián)（MALDI-TOF-TOF）質(zhì)譜對這些蛋白進(jìn)行鑒定。通過DAVID工具對上述基因進(jìn)行基因本體（GO）功能富集分析及基因組百科全書（KEGG）信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路富集分析。選取 IGHG1、TRFE、SERPINA1蛋白質(zhì)利用western blot對蛋白質(zhì)進(jìn)行驗證。
　　結(jié)果：膽固醇

3、結(jié)石和膽色素結(jié)石中均出現(xiàn)了特異性蛋白質(zhì)，由質(zhì)譜鑒定結(jié)果為轉(zhuǎn)鐵蛋白前體蛋白（TRFE）、白蛋白（ALB）、抗胰蛋白酶1（SERPINA1）、免疫球蛋白γ-1（IGHG1）、α血紅蛋白（HBA1）、β血紅蛋白（HBB），膽色素結(jié)石中不存在IGHG1。KEGG分析結(jié)果表明SERPINA1參與補體和凝血級聯(lián)反應(yīng)，它不僅是一種代謝酶類抑制劑，同時其還參與先天免疫的調(diào)控。IGHG1、TRFE、SERPINA1蛋白質(zhì)在膽囊結(jié)石中的表達(dá)量增高。