MCP-1及其受體CCR2在大鼠閉合性顱腦損傷中的表達及意義.pdf

1、目的：本實驗通過復制Marmarou's大鼠閉合性顱腦損傷模型，采用組織芯片技術(shù)結(jié)合免疫組化染色，研究閉合性顱腦損傷后單核細胞趨化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein,MCP-1)及其高親和性受體CCR2在腦組織中的表達部位、時序特點及相互關(guān)系，以期為閉合性顱腦損傷的干預治療提供理論和實驗依據(jù)。 方法：選用雄性SD大鼠，體重350g-400g。根據(jù)隨機化原則分為正常對照組、手術(shù)對照組和腦損傷

2、后1h組、2h組、4h組、8h組、12h組、24h組、48h組、72h組和5d組。 復制Marmarou's大鼠落體打擊損傷模型。分別于腦損傷后不同時間進行4％多聚甲醛灌注固定、取材。蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin，HE)和棓花青(Einarson)尼氏體染色法觀察腦損傷病理改變。用組織芯片儀制作組織芯片，免疫組化SP法檢測大腦皮質(zhì)、海馬和腦干神經(jīng)細胞MCP-1和受體CCR2的表達情況。采用Mias2000圖像

3、分析系統(tǒng)采集并計算陽性細胞數(shù)，全部數(shù)據(jù)均采用SPSS11.5 for windows分析軟件進行統(tǒng)計學處理。 結(jié)果： 1.病理學改變： 損傷組肉眼觀察可見腦組織水腫、蛛網(wǎng)膜下腔出血及腦挫傷，并累及腦底、腦干。組織學改變主要表現(xiàn)為：部分神經(jīng)細胞胞體固縮、深染、拉長或呈三角形；部分神經(jīng)細胞胞體腫脹，胞漿變空，核淡染，核膜及核仁完整。部分腦干神經(jīng)纖維增粗或呈波浪樣變。 2.MCP-1免疫組織化學染色結(jié)果對照組皮質(zhì)、海馬

4、、腦干部位均有少量免疫反應(yīng)陽性細胞表達。陽性物質(zhì)呈棕黃色，定位于細胞核。 損傷組皮質(zhì)、海馬、腦干部位MCP-1的免疫反應(yīng)陽性細胞數(shù)目增多，免疫陽性物質(zhì)增加，膠質(zhì)細胞呈強陽性表達。主要位于項葉皮質(zhì)受擊部位，海馬CA3、CA4區(qū)及齒狀回的陽性表達明顯，腦干免疫反應(yīng)呈陽性的神經(jīng)細胞和膠質(zhì)細胞亦顯著增加。 頂葉皮質(zhì)MCP-1免疫反應(yīng)陽性細胞計數(shù)于損傷后2h表達開始增多，至12h達峰值，然后逐漸降低。與對照組比較，損傷組2h-24

5、h組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，損傷后48h組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，損傷后1h,72h和5d組與對照組比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 海馬MCP-1免疫反應(yīng)陽性細胞計數(shù)于損傷后2h表達開始增多，至12h達峰值，然后逐漸降低。與對照組比較，損傷組2h-48h組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，損傷后1h,72h和5d組與對照組比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 腦干MCP-1免疫反應(yīng)陽性細胞計數(shù)于損傷

6、后2h表達開始增多，至12h達峰值，然后逐漸降低。與對照組比較，損傷組2h-24h組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，損傷后48h組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，1h,72h和5d組與對照組比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 3.CCR2免疫組織化學染色結(jié)果對照組皮質(zhì)、海馬、腦干部位均有少量免疫反應(yīng)陽性細胞表達。陽性物質(zhì)棕黃色，定位于細胞核。 損傷組皮質(zhì)、海馬、腦干部位CCR2的免疫反應(yīng)陽性細胞數(shù)目增多，免疫陽性物質(zhì)

7、增加，膠質(zhì)細胞呈強陽性表達。主要位于頂葉皮質(zhì)受擊部位，海馬以CA3、CA4區(qū)及齒狀回表達明顯，腦干免疫反應(yīng)陽性的神經(jīng)細胞和膠質(zhì)細胞亦顯著增加。 頂葉皮質(zhì)CCR2免疫反應(yīng)陽性細胞計數(shù)于損傷后4h表達開始增多，至24h達峰值，然后逐漸降低。與對照組比較，損傷組4h-72h組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，損傷后1h,2h和5d組與對照組比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 海馬CCR2免疫反應(yīng)陽性細胞計數(shù)于損傷后4h表達開始

8、增多，至24h達峰值，然后逐漸降低。與對照組比較，損傷組4h-72h組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，損傷后1h,2h和5d組與對照組比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 腦干CCR2免疫反應(yīng)陽性細胞計數(shù)于損傷后4h表達開始增多，至24h達峰值，然后逐漸降低。與對照組比較，損傷后4h組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，損傷組8h-72h組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。損傷后1h,2h和5d組與對照組比較無統(tǒng)計學意義(P>0.

9、05)。 結(jié)論： 1.正常時皮質(zhì)、海馬和腦干部位均有少量MCP-1免疫反應(yīng)陽性細胞表達。腦損傷后皮質(zhì)、海馬和腦干部位的MCP-1免疫反應(yīng)陽性表達增強，免疫反應(yīng)陽性細胞數(shù)目增多，損傷后2h皮質(zhì)、海馬和腦干部位的MCP-1表達開始增強，12h達峰值，然后逐漸降低，72h基本回落至正常水平。 2.正常時皮質(zhì)、海馬和腦干部位均有少量CCR2免疫反應(yīng)陽性細胞表達。腦損傷后皮質(zhì)、海馬和腦干部位的CCR2表達增強，免疫反應(yīng)陽性