沙利度胺在肝癌細(xì)胞MHCC97-H荷瘤裸鼠中的作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)學(xué)研究.pdf

1、沙利度胺因具有抗血管生成作用而可能對(duì)某些腫瘤有治療作用。本研究旨在通過觀察沙利度胺對(duì)裸鼠原位MHCC97-H種植瘤生長的影響，探討沙利度胺的抗腫瘤作用機(jī)制和與化療藥物的聯(lián)合應(yīng)用。 第一部分實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的構(gòu)建目的：通過建立動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)為進(jìn)一步研究沙利度胺對(duì)肝癌的作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)的平臺(tái)。方法：先將肝癌腫瘤細(xì)胞株MHCC97-H復(fù)蘇后培養(yǎng)至所需要的細(xì)胞數(shù)2×107mL，將腫瘤細(xì)胞接種至裸小鼠的右前肢腋下皮下成瘤，待瘤塊長至直徑約1cm

2、左右時(shí)，在無菌條件下將瘤塊切成1mm3的小塊，原位移植至裸小鼠的肝臟左葉肝包膜下。通過稱量原位移植裸小鼠接種后每周體重的變化來觀察其生活習(xí)性；最后觀察原位瘤體的形成來研判成瘤的效果。結(jié)果：成功率：皮下移植瘤成功為100％(5/5)；原位移植瘤模型成功為100％(25/25)。所有的實(shí)驗(yàn)裸小鼠術(shù)后均能存活至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，存活率100％。結(jié)論：該實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的構(gòu)建方法設(shè)計(jì)新穎，具有良好的成瘤率，對(duì)原腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性具有一貫性，為肝癌的實(shí)驗(yàn)研

3、究提供的一個(gè)很好的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。 第二部分藥物對(duì)荷瘤裸小鼠的作用及相關(guān)指標(biāo)的測定目的：通過對(duì)原位荷瘤裸小鼠進(jìn)行藥物干預(yù)，研究沙利度胺對(duì)人肝細(xì)胞癌(HCC)血管生成和腫瘤生長侵襲的作用，探討沙利度胺對(duì)HCC的作用機(jī)制，以及與5-FU在HCC中的聯(lián)合應(yīng)用。方法：將25只原位荷瘤裸小鼠分成5組，分別為A組沙利度胺1組(成瘤術(shù)后第1天給藥)、B組沙利度胺2組(成瘤術(shù)后第5天給藥)、C組5-FU組、D組聯(lián)合組(沙利度胺+5-FU)和E組對(duì)照組

4、(蒸餾水)。沙利度胺采用灌胃方式按200mg/Kg/d給藥，連續(xù)35d；5-FU采用腹腔注射按20mg/Kg/d給藥，連續(xù)5d，后自由飲用蒸餾水。術(shù)后第35d脫頸椎法處死小鼠，取出腫瘤標(biāo)本和肺臟標(biāo)本，測量瘤體的大小，計(jì)算其體積、重量，分別用免疫組化法(SP法)檢測VEGF和微血管密度(MVD)，用RT-PCR法檢測VEGF和MMP-2在腫瘤組織中表達(dá)的變化。所有數(shù)據(jù)經(jīng)過SPSSl3.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析。結(jié)果：D組瘤體大小和重量明顯小于E組

5、，和A組、B組、C組比較也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；A組、B組和D組瘤塊中的．VEGF表達(dá)和MVD計(jì)數(shù)值以及肺臟轉(zhuǎn)移灶和E組比較差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，和C組比較也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；五組腫瘤組織中MMP-2的表達(dá)差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：沙利度胺作為一種抗血管生成劑，能抑制腫瘤的生長和降低肺轉(zhuǎn)移。對(duì)荷瘤裸小鼠原位肝癌的作用機(jī)制可能主要是通過抑制腫瘤組織中VEGF的表達(dá)和MVD的形成來實(shí)現(xiàn)的，對(duì)MMP-2表達(dá)作用不確定；而且沙利度胺聯(lián)合細(xì)胞毒性藥物5-