基于絲氨酸蛋白酶催化中心的寡聚核苷酸化學(xué)修飾研究.pdf

1、中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士學(xué)位論文基于絲氨酸蛋白酶催化中心的寡聚核苷酸化學(xué)修飾研究姓名：梁遠(yuǎn)軍申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：藥物化學(xué)指導(dǎo)教師：劉克良20060501軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院博ij學(xué)位論文摘要基于絲氨酸蛋白酶催化中心的寡聚核苷酸化學(xué)修飾研究摘要DNA分子精確識(shí)別、精確組裝等獨(dú)特性質(zhì)以及核酸相關(guān)技術(shù)的發(fā)展，使得DNA作為優(yōu)秀的自組裝分子得到廣泛應(yīng)用，化學(xué)修飾則賦予了DNA更多生物學(xué)功能。眾多蛋白酶雖然功能各異，但它們具有共同的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)

2、，即一級結(jié)構(gòu)均為聚酰胺結(jié)構(gòu)。側(cè)鏈基團(tuán)的不同，產(chǎn)生了酶功能的多樣性，因此氨基酸殘基側(cè)鏈基團(tuán)對酶功能具有結(jié)構(gòu)學(xué)意義。絲氨酸蛋白水解酶家族成員乙酰膽堿酯酶、Ⅱ糜蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶的催化中心具有相似的結(jié)構(gòu)特征，即由絲氨酸、組氨酸、天冬氨酸(谷氨酸)組成的催化三聯(lián)體。也可認(rèn)為，絲氨酸提供的羥基、組氨酸提供的咪唑基、天冬氨酸(谷氨酸)提供的羧基組成的精細(xì)三維結(jié)構(gòu)在催化行為中起著關(guān)鍵作用。因此，抽提出活性中心的側(cè)鏈基團(tuán)羥基、咪唑基和羧基，可作為模

3、擬絲氨酸蛋白水解酶的功能域。本課題以化學(xué)修飾為手段，將上述功能基包括羥基、咪唑基等基團(tuán)以烷基化或烷氧基化形式連接于磷酸殘基，獲得了修飾的亞磷酰胺單體14個(gè)。用這些單體分別設(shè)計(jì)合成了10個(gè)dT5寡聚核苷酸模型序列，研究了功能化單體在寡聚核苷酸合成中的穩(wěn)定性，并提出了磷酸殘基修飾寡聚核苷酸合成的合成策略。據(jù)此，初步設(shè)計(jì)合成修飾寡聚核苷酸序列并研究了其雜交性質(zhì)，發(fā)現(xiàn)修飾寡聚核苷酸序列導(dǎo)致Tm值的輕微降低。本工作為基于DNA分子組裝模擬絲氨酸蛋