異丙酚對全身高溫療法致兔急性腦損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：觀察42℃全身高溫治療2h兔生命體征、血氣酸堿及部分血流動力學(xué)指標(biāo)變化；檢測腦中反映氧化應(yīng)激程度的SOD、MDA變化；檢測腦中反映酸中毒程度的LAC、VADL變化；測定皮質(zhì)區(qū)血管內(nèi)皮細(xì)胞HO-1的表達(dá)變化；檢測皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況，從而探討全身高溫導(dǎo)致腦損傷的可能機(jī)制，以及異丙酚在熱損傷過程中的腦保護(hù)作用；進(jìn)而不斷豐富麻醉新領(lǐng)域中的基礎(chǔ)理論知識，并從麻醉角度為腫瘤治療熱療新技術(shù)的廣泛開展提供良好平臺。 方法： 1

2、.動物模型的制備：新西蘭大白兔24只，模擬全身高溫治療的方式采用全身高溫照射，維持兔肛溫42℃兩小時。隨機(jī)均分兔為陰性對照組(A組)、熱應(yīng)激模型組(B組)、異丙酚低劑量5mg·kg<'-1>·h<'-1>泵注組(C組)、異丙酚高劑量10 mg·kg<'-1>·h<'-1>泵注組(D組)。 2．監(jiān)測并記錄WBH過程中于高溫照射前，高溫照射后體溫達(dá)42℃0min、30min、60min、90min、120min以及停止加溫后動物體溫

3、恢復(fù)穩(wěn)定時刻各組兔肛溫、鼓膜溫、HR、MAP、PaCO2、血PH值、BE(BEecf)、實際HCO<,3><'->(AB)水平； 3．于高溫照射前，高溫照射后體溫達(dá)42℃0min、30min、60min、90min、120min以及停止加溫后動物體溫恢復(fù)穩(wěn)定時刻測定頸內(nèi)靜脈球部血丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)濃度，及乳酸(LAC)含量，并計算動靜脈血乳酸差值(VADL)。丙二醛(MDA)與超氧化物歧化酶(SOD)的測

4、定用分光光度計測定吸光度值，并用公式計算血清中的含量。4．取預(yù)留的0.4g腦皮質(zhì)組織，作腦含水量百分比測定以反映神經(jīng)元腫脹度。 5．四組動物均在高溫處理后取腦組織標(biāo)本制作石蠟切片，用HE染色觀察皮質(zhì)與海馬區(qū)腦組織病理形態(tài)損傷；用SABC免疫組化染色研究血管內(nèi)皮細(xì)胞血紅素氧化酶-l(HO-1)的表達(dá)，用灰度值半定量反應(yīng)表達(dá)程度；原位末端脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)dUTP標(biāo)記(TIJNEL)法測定細(xì)胞凋亡，每只兔隨機(jī)取兩張切片，40

5、0倍光鏡下隨機(jī)計數(shù)5個視野平均陽性細(xì)胞數(shù)。 6．統(tǒng)計學(xué)處理實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差( ±s)表示或以(中位數(shù)±全距)表示，采用SPSSl2.0軟件進(jìn)行單因素方差分析或秩和檢驗。 7．將腦皮質(zhì)細(xì)胞凋亡百分值分別與體溫恢復(fù)穩(wěn)定時腦血清SOD、MDA濃度進(jìn)行直線相關(guān)性分析。 結(jié)果： 1．一般狀況與指標(biāo)觀察施加全身高溫處理后，肛溫、鼓膜溫、心率、平均動脈壓、動脈二氧化碳分壓、血PH值、堿剩余、實際碳酸氫根等指標(biāo)均

6、發(fā)生變化，多時點與A組有差異，C、D組中這些指標(biāo)與B組比較也多有差異(P

7、異，MDA排列順序為B組>C組>D組，SOD排列順序為B組C組>D組(P<0.05)。 4．石蠟切片HE染色A組HE染色無明顯改變，B組有損傷出現(xiàn)，皮質(zhì)與海馬區(qū)大部分神經(jīng)元腫脹明顯，部分缺失，胞漿嗜伊紅深染，核固縮深染，周邊部膠質(zhì)細(xì)胞增生，

8、細(xì)胞松散間隙擴(kuò)大，細(xì)胞排列紊亂，染色深淺不均；C組神經(jīng)元輕度腫脹，偶有散在細(xì)胞群或多個細(xì)胞變性壞死，部分核固縮深染，其中可見散在的單個或小細(xì)胞變性壞死；D組偶見神經(jīng)元腫脹，細(xì)胞淡染，細(xì)胞數(shù)量稍有減少。 5．對腦皮層血管內(nèi)皮細(xì)胞HO-1蛋白表達(dá)的影響HO-1陽性細(xì)胞呈棕黃或棕褐染色，A組未見血管內(nèi)皮細(xì)胞HO-1免疫陽性細(xì)胞；B、C、D組血管內(nèi)皮中均出現(xiàn)HO-1免疫陽性細(xì)胞，B組HO-1顯色顯著，有明顯的表達(dá)。B、C、D組H0-

9、1表達(dá)與A組均有差異，三組間HO-1表達(dá)也有差異，表達(dá)的排列順序為B組>C組>D組(PC組>D組>A組(P

10、細(xì)胞凋亡值與體溫恢復(fù)穩(wěn)定時腦血清SOD、MDA濃度之間采用直線相關(guān)分析，腦皮質(zhì)細(xì)胞凋亡值與體溫恢復(fù)穩(wěn)定時腦血清SOD濃度之間呈負(fù)相關(guān)，r=-0.725．P

11、達(dá)引起，氧自由基的堆積導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞H0-1蛋白的過度表達(dá)；氧化中間產(chǎn)物堆積與腦皮層血管內(nèi)皮細(xì)胞H0-1蛋白的過度表達(dá)，導(dǎo)致腦細(xì)胞凋亡。異丙酚可明顯抑制全身高溫下機(jī)體的高應(yīng)激反應(yīng)，減輕氧化中間產(chǎn)物的堆積，減輕酸中毒的繼發(fā)損害，并因此減輕腦細(xì)胞腫脹、丟失等中樞神經(jīng)組織病理性損傷；通過抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)抑制腦皮層血管內(nèi)皮細(xì)胞HO-1在腦組織中的過度表達(dá)，使H0-1表達(dá)量在腦血管內(nèi)皮保護(hù)的范圍內(nèi)，不至達(dá)到內(nèi)皮損傷的程度，從而減輕微循環(huán)與血腦