醋酸鉛致神經(jīng)細胞凋亡的研究.pdf

1、前言鉛是最古老的毒物之一。在現(xiàn)今生活中，由于鉛的廣泛應用使得鉛的污染也廣泛存在，雖然我們采取了一些措施來減少鉛的影響，但是鉛仍然對人體健康造成了很大傷害。鉛具有很強的神經(jīng)毒性，主要表現(xiàn)為鉛對未成熟個體學習記憶的損害，使未成年人發(fā)生學習記憶功能障礙。鉛對神經(jīng)系統(tǒng)的毒性作用和低濃度鉛引發(fā)的神經(jīng)元凋亡有關。神經(jīng)細胞過度凋亡，則必然會對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的正常發(fā)育和分化造成嚴重的影響。在體的動物研究已經(jīng)有結(jié)果證明這一現(xiàn)象的存在。我們建立了細胞模型來進

2、一步研究這一作用的分子以及基因機制。我們選用了以前研究中不常見的人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞U-251細胞作為研究對象。 目的:建立鉛染毒導致U-251細胞凋亡的模型。觀察U-251細胞在鉛染毒情況下的變化，并確認其發(fā)生了細胞凋亡。研究其在凋亡的過程凋亡相關基因的改變。 方法: MTT；DNA LADDER；細胞熒光染色；基因芯片。 結(jié)果: 1．U-251細胞的生長曲線。細胞在37℃，5％CO2和飽和濕度的培養(yǎng)箱中培

3、養(yǎng)，接種后每二十四小時進行細胞計數(shù)，獲得細胞的生長曲線。從曲線可知，U-251細胞的倍增時間約為24小時，第1d細胞處于停滯期；第2-6d細胞處于對數(shù)生長期；第7-8d細胞處于平臺期，此時的細胞由于數(shù)量太多，互相接觸，導致接觸抑制，生長速度變慢，開始死亡，數(shù)量有所減少。 2．使用MTL法測定醋酸鉛作用于U-251細胞的時間濃度曲線，并使用SPSS軟件對實驗結(jié)果進行方差檢驗。試驗的結(jié)果說明，醋酸鉛能夠明顯抑制細胞的生長，這種抑制

4、作用與醋酸鉛的作用時間和作用劑量都呈正相關的關系。其IC50在0.2mmol/L附近。隨著作用時間的增加，各作用劑量組之間的差異也更加明顯。 3．U-251細胞凋亡的確定以及醋酸鉛作用時間和濃度的確定。在醋酸鉛的作用下，U251細胞確實發(fā)生了細胞凋亡，這種導致凋亡的作用隨著作用劑量和作用時間的增加而增強。綜合MTT的結(jié)果和本部分對細胞凋亡的檢測試驗結(jié)果，確定下一步試驗的作用條件為醋酸鉛濃度為0.5mmol/L，作用時間為72小時