2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、篩選和應(yīng)用紅豆杉內(nèi)生真菌發(fā)酵生產(chǎn)紫杉醇己成為當(dāng)前醫(yī)藥領(lǐng)域研究的熱點之一。GGPP合成酶是紫杉醇生物合成途徑中的關(guān)鍵酶,能夠催化合成紫杉烷類化合物的共同前體--牻牛兒牻牛兒焦磷酸酯(簡稱GGPP)。利用固定化技術(shù)發(fā)酵生產(chǎn)代謝產(chǎn)物,由于固定化酶具有可長期重復(fù)使用,連續(xù)發(fā)酵和簡化代謝產(chǎn)物分離過程等優(yōu)點,是一種很有發(fā)展前景的新型技術(shù)。因此,本文以產(chǎn)紫杉烷類化合物的云南紅豆杉內(nèi)生真菌菌株12.3.2作為研究對象,對其生理特性、固定化條件和GGPP

2、合成酶活性進行了一系列初步研究。 首先,考察了培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件對其生理特性的影響,研究發(fā)現(xiàn):溫度對菌絲體生長具有明顯的影響,最適溫度為30℃;pH值在前24小時呈下降趨勢,然后開始逐步升高,在5天后趨于穩(wěn)定,綜合pH的變化,菌株在中性條件時生長良好,在接種后3天菌絲體干質(zhì)量可達到最大值;蔗糖對菌絲體的生長最為有利,對有機氮的利用要優(yōu)于對無機氮的利用;菌絲體干質(zhì)量與培養(yǎng)基質(zhì)量濃度呈正向關(guān)系,而且較高的培養(yǎng)基質(zhì)量濃度對其生長沒有抑制

3、作用;對維生素依賴性不強,但添加適量的維生素可以促進其生長。 其次,建立TTC法測定紅豆杉內(nèi)生真菌分生孢子的脫氫酶酶活,并以此來考察固定化效果。用海藻酸鈣包埋云南紅豆杉內(nèi)生真菌12.3.2分生孢子制成固定化孢子的微膠珠。通過TTC法測定紅豆杉內(nèi)生真菌分生孢子的脫氫酶活力,并以此來考察固定化粒徑、海藻酸鈉的濃度、CaCl2濃度、單位凝膠分生孢子量、固定化時間以及溫度等六個因素對固定化效果的影響。通過實驗確定,當(dāng)海藻酸鈉濃度為4.0

4、%,CaCl2濃度為2.6%,固定化時間為6h,溫度為40℃,單位凝膠中分生孢子量應(yīng)為1mL/10g凝膠(孢子懸液濃度為2.3×109個/mL),此條件下包埋率為46%,此時內(nèi)生真菌12.3.2活力最強,固定化效果最佳。因此,TTC法可以準(zhǔn)確反應(yīng)紅豆杉內(nèi)生真菌分生孢子的固定化效果,固定的分生孢子具有更好的發(fā)酵特性。 最后,初步探討了GGPP合成酶活性的檢測。該酶屬于異戊烯基轉(zhuǎn)移酶,催化FPP與IPP發(fā)生親電子耦合形成GGPP。對

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