分化抑制因子1及其信號通路在中耳膽脂瘤骨質(zhì)破壞中的作用.pdf

1、研究目的：探討分化抑制因子1（inhibitors of differentiation1,Id1）及其信號通路在中耳膽脂瘤骨質(zhì)破壞中的作用。
　　研究方法：（1）收集膽脂瘤患者的31例膽脂瘤標(biāo)本及14例外耳道正常皮膚標(biāo)本，以免疫組化技術(shù)，分析膽脂瘤臨床標(biāo)本和外耳道正常皮膚標(biāo)本組織蛋白酶K(CathepsinK,CTSK)表達(dá)情況。（2）以免疫印跡法測量臨床膽脂瘤標(biāo)本中NFATc1、c-Fos、CathepsinK、TRAP、OS

2、CAR等蛋白表達(dá)情況。（3）以Id1基因轉(zhuǎn)染人角化細(xì)胞株Rhek-1A，建立體外模型。應(yīng)用細(xì)胞消化計數(shù)法觀察Id1基因轉(zhuǎn)染Rhek-1A細(xì)胞后增殖活性的變化。（4）實時定量PCR法觀察轉(zhuǎn)染后Id1、NF-κB、NFATc1、c-Fos、CathepsinK、TRAP、OSCAR等mRNA的變化。（5）蛋白印跡法觀察轉(zhuǎn)染后NF-κB、NFATc1、CathepsinK等表達(dá)的變化。
　　研究結(jié)果：（1）CathepsinK主要表達(dá)于

3、膽脂瘤組織及外耳道皮膚組織上皮細(xì)胞漿。CathepsinK在膽脂瘤組織中陽性表達(dá)率為96.8％，明顯高于其在外耳道正常皮膚組織中的陽性表達(dá)率50%（P<0.01)。（2）臨床膽脂瘤標(biāo)本中NFATc1、c-Fos、CathepsinK、TRAP、OSCAR等蛋白均有不同程度表達(dá)。（3）Id1基因轉(zhuǎn)染Rhek-1A細(xì)胞后增殖能力明顯提高。（4）實時定量PCR觀察到Id1、NF-κB、NFATc1、c-Fos、CathepsinK、TRAP、

4、OSCAR在Rhek-Id1細(xì)胞的表達(dá)分別是Rhek-1A細(xì)胞的10.14倍、25.19倍、74.35倍、1.14倍、18.46倍、43.08倍、55.47倍。（5）免疫印跡法觀察到 Rhek-Id1細(xì)胞 Id1、NFATc1、c-Fos、CathepsinK、TRAP、OSCAR的蛋白表達(dá)高于Rhek-1A細(xì)胞。
　　結(jié)論：Id1可以引起Rhek-1A細(xì)胞過度增生，激活NF-κB通路，上調(diào)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子c-Fos和 NFATc1,